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基于栅藻生物发光检测的不同炮制和复方中药药性的初步研究

摘要研究目的:<br>  中药药性的客观化和定量化一直是中药药性理论研究的热点和难点,是实现中药现代化进程中亟待解决的问题。本课题基于生物光子相干性理论,利用生物光子辐射检测技术,以栅藻作为生物指示剂,探索可表征炮制中药及复方寒热药性的生物光子量化指标,为中药药性的定量化奠定基础。<br>  研究方法:<br>  利用栅藻作为生物指示剂测量不同中药炮制品和经典复方的生物光子辐射,采用“顾参数”模型拟合实验数据,寻找表征不同炮制品和复方差异的生物光子量化指标;高效液相色谱法测定不同中药炮制品主要活性成分的含量,探索生物光子指标与成分含量的相关性;动物实验验证实验所用中药炮制品的寒热药性。<br>  研究内容与结果:<br>  1、栅藻作为生物指示剂的实验条件优化。首先,比较不同点间隔时间下栅藻延迟发光数据“顾参数”拟合的拟合度,选定最优点间隔时间为0.1s;其次,对比不同浓度栅藻的延迟发光参数,获得栅藻使用的合适浓度范围为(2.5~3.5 ) × 107个/mL,实际实验中我们选用的栅藻浓度为3.0 × 107个/mL;最后,比较不同生长阶段栅藻的延迟发光参数,确定栅藻使用的最优生长阶段为40~60天。<br>  2、中药炮制品的药性研究。(1)以生地黄、熟地黄为例确定炮制中药煎煮液的最佳加药量为 100μL。(2)以制天南星为例验证激发延迟发光线性拟合斜率 k 是较自然延迟发光平均强度更稳定的参数。(3)检测制天南星、胆南星(各 6 个批次)的生物延迟发光及β-谷甾醇、胆红素、胆酸含量,结果表明制天南星的激发延迟发光线性拟合斜率k显著高于胆南星,即温热中药k值高于寒凉中药k值,斜率k与β-谷甾醇含量呈显著负相关关系,与胆红素、胆酸含量也有负相关趋势。(4)检测生地黄、熟地黄(各6 个批次)的生物延迟发光及梓醇、毛蕊花糖苷、5-羟甲基糠醛含量,发现生地黄的激发延迟发光线性拟合斜率k显著高于熟地黄,即温热中药k值低于寒凉中药k值,斜率k仅与5-羟甲基糠醛含量呈显著负相关关系。小鼠灌胃实验发现给药生地黄的小鼠血清丙二醛含量、肝脏ATPase活力显著高于给药熟地黄的小鼠,说明生地黄、熟地黄质量较差,寒热药性可能发生变化。(5)检测炮制前后药性未发生变化的生甘草与炙甘草、生何首乌与制何首乌(各6个批次)的生物延迟发光及主要活性成分含量,发现其生品与制品的激发延迟发光线性拟合斜率k无显著性差异,斜率k与其主要活性成分含量无显著相关关系。<br>  3、中药复方及方内中药的药性研究。首先以黄连、吴茱萸为例确定复方中药煎煮液的最佳加药量为 20μL。之后检测了加入四逆汤、左金丸与反左金丸、麻黄汤与麻杏石甘汤的复方及方内中药煎煮液的栅藻延迟发光,发现温热中药及复方的激发延迟发光线性拟合斜率k显著高于寒凉中药及复方。<br>  研究结论:<br>  激发延迟发光线性拟合斜率k是可表征不同中药炮制品和复方差异的生物光子量化指标,温热中药的激发延迟发光线性拟合斜率k普遍高于寒凉中药,本实验为中药药性的现代化研究提供了一种新的思路和方法。

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导师 韩金祥
发布时间 2018-12-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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