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摘要目的：<br>　　Gα13是G蛋白G12亚家族中的一员，由GNA13基因编码，该基因位于人类17号染色体上，其功能包括调控细胞的形态、收缩、迁移和分化成熟等。GNA13是生发中心B细胞来源（germinal center-derived B-cell，GCB）淋巴瘤中最频繁突变的基因之一，主要见于约15-33%的GCB型的弥漫性大B细胞淋巴瘤（GCB diffuse large B cell lymphoma,GCB-DLBCL）和15%的伯基特（Burkitt）淋巴瘤，但滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma，FL）尚未见研究报道，且在其它非生发中心淋巴组织肿瘤类型中基本不发生基因突变。GNA13基因突变可能导致其蛋白表达减少或缺失，而GNA13缺失会引起GCB细胞的生长和扩散，因此有助于GCB来源淋巴瘤的发生发展。本实验旨在探讨：GNA13蛋白（Gα13）是否为GCB来源淋巴瘤的新型标记物；在GCB来源淋巴瘤（GCB-DLBCL、FL和Burkitt淋巴瘤）中，GNA13蛋白表达与其基因突变的关系；并同时研究Ki67和MCM2的相关性及MCM2的临床应用价值。<br>　　方法：<br>　　收集华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所2015年至2017年确诊为非霍奇金B细胞淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin lymphomas，B-NHLs）140例，其中DLBCL61例，FL42例，Burkitt淋巴瘤6例，套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）12例，小淋巴细胞淋巴瘤（small lymphocytic lymphoma，SLL）8例，边缘区淋巴瘤（marginal zone lymphoma，MZL）11例；同时还收集了生发中心滤泡辅助T细胞（Follicular helper T cell，TFH）来源的血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（Angioimmunocytogenic T cell lymphoma，AITL）8例；另收集慢性扁桃体炎和淋巴结反应性增生（滤泡增生为主）各8例设为对照组。1、以上病例均行GNA13免疫组化染色（EnVision两步法），同时对DLBCL病例行CD10、BCL-6、GCET1、MUM1、FOXP1和LMO2免疫组化染色，运用Hans、Choi和Tally算法将DLBCL分为GCB型和non-GCB型（选择三种算法分型一致的病例）；2、选取GCB来源的淋巴瘤（GCB-DLBCL、FL和Burkitt淋巴瘤）中GNA13阴性、弱阳性和阳性表达的所有病例；non-GCB来源的淋巴瘤（15例non-GCB-DLBCL、12例MCL、11例MZL和8例SLL）及对照组各5例均进行GNA13基因外显子组测序研究；3、对上述B-NHLs病例均行MCM2、Ki67免疫组化染色，观察MCM2和Ki67蛋白表达情况，运用统计学方法分析其相关性。<br>　　结果：<br>　　1、免疫组化结果<br>　　（1）在61例DLBCL中：①根据Hans算法，分为30例GCB型和31例Non-GCB型；②根据Choi算法，分为26例GCB型和35例Non-GCB型；③根据Tally算法，分为20例GCB型和41例Non-GCB型；Hans、Choi和Tally三种算法进行成对比较，发现三种算法没有明显差异，具有很大的一致性（Hans vs.Choi,kappa值=0.803,P＜0.001;Hans vs.Tally,kappa值=0.670,P＜0.001;Choi vs.Tally,kappa值=0.793,P＜0.001）。<br>　　（2）在129例B-NHLs中：①DLBCL50例（三种算法分型一致的病例，另外11例三种算法不统一），20例GCB型和30例Non-GCB型，GNA13阳性表达共计11例且只存在GCB型中，总阳性率约为22.0%（11/50），GCB型中GNA13阳性率约为55.0%（11/20）；②FL42例，GNA13阳性表达共计34例，总阳性率约为81.0%（34/42）；其中8例FL1级、10例FL2级、5例FL3A和19例FL3B级，GNA13阳性率分别约为100%（8/8）、100%（10/10）、80%（4/5）和63.2%（12/19）；③Burkitt淋巴瘤6例，GNA13的阳性率约为50.0%（3/6）；④在8例SLL、12例MCL和11例MZL中，GNA13均阴性或仅残存生发中心表达。血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（AITL）8例，GNA13阳性率约为100%（8/8）；在16例对照组中，GNA13均表达于生发中心，阳性率约为100%（16/16）。<br>　　2、GNA13基因外显子组测序结果<br>　　114例B-NHLs（20例GCB-DLBCL、42例FL、6例Burkitt淋巴瘤、15例non-GCB-DLBCL、12例MCL、11例MZL和8例SLL）及对照组各5例均采用外显子组测序的方法来检测GNA13的基因突变情况。结果显示：在18例GCB-DLBCL和29例FL中，有5例GCB-DLBCL和3例FL（2例FL1级和1例FL3B级）发生了GNA13基因突变，突变均发生于4号外显子组，突变率分别约为27.8%（5/18）和10.3%（3/29）；且在这些突变的病例中，GNA13免疫组化有7例均显示弱阳性或阴性表达，仅有1例FL1级显示GNA13阳性表达；在3例Burkitt淋巴瘤、11例non-GCB-DLBCL、11例MCL、9例MZL、4例SLL和10例对照组中均未检测出GNA13基因突变，其余例数均显示测序失败。<br>　　3、MCM2和Ki67相关性<br>　　140例B-NHLs（MZL、SLL、MCL、FL、DLBCL和Burkitt淋巴瘤）及对照组各8例均行Ki67和MCM2免疫组织化学检测，结果显示：在对照组中，MCM2和Ki67主要表达于次级滤泡的生发中心；在B-NHLs中，MCM2的阳性表达率约为5%-100%不等。在MZL、SLL、MCL、FL、DLBCL和Burkitt淋巴瘤中,MCM2与Ki67相关系数r值依次分别为rMZL=0.807（显著性P=0.005）,rSLL=0.964（显著性P=0.036），rMCL=0.988（显著性P=0）,rFL=0.973（显著性P=0）,rDLBCL=0.937（显著性P=0）,rBurkitt=0.995（显著性P=0）,均显示两个指标的相关性很强，故认为MCM2可以代替Ki67来评估肿瘤细胞的增殖情况；而且MCM2从惰性的B细胞淋巴瘤（MZL、SLL和FL1-2级）到侵袭性的B细胞淋巴瘤（FL3级、MCL和DLBCL），最后到高度侵袭性的Burkitt淋巴瘤，其阳性表达率随着侵袭程度的增加而呈现明显升高的趋势，提示MCM2的表达和肿瘤侵袭性有关。<br>　　结论：<br>　　1、在DLBCL的免疫组化分型中，Hans、Choi和Tally三种算法之间没有明显差异，具有一致性。<br>　　2、在16例对照组中，GNA13均表达于生发中心；在GCB来源淋巴瘤(GCB型DLBCL、FL、Burkitt淋巴瘤)和TFH来源的AITL中，GNA13均有不同程度表达；在non-GCB来源淋巴瘤（non-GCB-DLBCL、SLL、MCL和MZL）中，GNA13均阴性表达或仅残存生发中心表达。提示GNA13不仅是GCB来源淋巴瘤的一种新型有价值的标记物，也可能是TFH来源淋巴瘤的标记物，即可能为GC细胞的一种新型标记物。<br>　　3、在GCB来源淋巴瘤中，GNA13阳性率在低级别FL（1-2级）、高级别FL（3A/3B级）、GCB型DLBCL和Burkitt淋巴瘤中依次降低，提示GNA13缺或低表达可能与GCB来源淋巴瘤侵袭性程度有关。<br>　　4、在GCB来源淋巴瘤中，GNA13免疫组化弱阳性或阴性表达可能提示该肿瘤发生了GNA13基因突变。<br>　　5、在非霍奇金B细胞淋巴瘤中，Ki67和MCM2具有强相关性。