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摘要酸碱失衡，特别是pH值的下降，在引起许多病理生理过程的相关机制中，都起到十分重要的作用。脑，这一具备极为复杂精细功能的器官，对于pH值的微小变化是十分敏感的。脑具有高耗能、低储备的特点，在面临缺血、缺氧的状态时，大脑由葡萄糖氧化供能向无氧酵解的方式转变，无氧酵解的中间产物乳酸大量堆积，同时由于供能不足导致能量耗竭，生成ATP的效率低，ATP大量水解。而乳酸堆积和ATP水解产生的H+增加，都是脑发生酸中毒的重要因素。目前有研究证实，脑血管损伤的病理过程中有乳酸堆积的发生，另一方面，小胶质细胞的炎症反应与脑血管疾病的关系十分密切。而目前还没有报告关于乳酸堆积和pH值降低对脑内细胞影响的相关研究。褪黑素具有清除氧自由基、抗氧化，以及神经保护的作用，也将探讨其对神经元的保护作用。<br>　　目的:<br>　　1.酸性环境下神经元形态的变化及褪黑素的保护作用。<br>　　2.酸性环境下小胶质细胞功能的变化。<br>　　方法:<br>　　首先，为探讨pH值的改变对神经元形态的影响，在原代神经元上进行酸处理实验。利用细胞免疫荧光技术观察神经元形态，单光子激光共聚焦扫描显微镜（LSM780）拍摄荧光图片，运用Image J软件以及Sholl分析插件统计分析神经元单个细胞树突总长度和树突复杂性的变化。其次，为验证褪黑素对神经元的保护作用，同样用上述分析神经元形态的方法进行实验。最后，为探讨乳酸对小胶质细胞功能的直接影响，设置乳酸不同浓度处理组，改变细胞培养基中乳酸的浓度。通过划痕试验，在活细胞工作站中观察和分析小胶质细胞迁移和增殖功能的改变；通过细胞免疫荧光技术，运用Image J软件进行细胞计数，统计小胶质细胞吞噬功能的改变；利用小胶质细胞吞噬荧光标记的葡聚糖（FITC-dextran）的特性，通过流式检测炎症小胶质细胞吞噬功能的变化。<br>　　结果:<br>　　1.pH6.5的酸性环境下，神经元树突总长度缩短，树突复杂性降低，CCK-8结果提示细胞活性没有受到影响。<br>　　2.pH6.2的酸性环境下，神经元树突分枝数量减少程度以及神经元树突复杂性降低程度较pH6.5时更为显著，且细胞存活率显著降低。<br>　　3.褪黑素预处理后，pH6.2的酸性环境对神经元形态上的损伤程度显著降低，表现为树突总长度增长及树突复杂性升高，说明酸性环境下褪黑素对神经元有保护作用。<br>　　4.CCK-8结果提示乳酸浓度在2.42mmol/L至12.1mmol/L之间，细胞活性没有受到影响；当浓度超过24.2mmol/L时，细胞存活率显著降低。<br>　　5.乳酸浓度达到12.1mmol/L时小胶质细胞迁移速度和增殖速度增加。<br>　　6.乳酸浓度达到12.1mmol/L时，细胞免疫荧光结果提示CD68阳性小胶质细胞占小胶质细胞总数的比例升高，流式检测结果提示吞噬了FITC标记的葡聚糖（FITC-dextran）的小胶质细胞比例升高，说明小胶质细胞被激活，细胞的吞噬功能增强。<br>　　结论:<br>　　脑组织的酸碱失衡在许多病理生理过程中起着重要的作用，本课题在细胞水平上分别论证了酸性环境对小胶质细胞和神经元这两类细胞的功能影响和损伤作用，同时还验证了褪黑素在酸性环境中对神经元有保护作用。