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摘要线粒体是真核细胞内的重要细胞器，主要功能是为细胞代谢提供能量。线粒体由内外两层膜组成，其中内膜向内凹陷形成嵴并将内膜分为两个区域-内边界膜和嵴膜，二者由嵴联接点连接起来。正常膜形态的维持尤其是嵴膜的形成对于维持线粒体的正常功能至关重要。最新研究表明线粒体嵴组织复合物（mitochondrial contact site and cristae organizing system，MICOS）是调控线粒体嵴膜的形成及维持嵴膜正常形态的关键因子。Mic60-Mic19复合物作为MICOS复合物核心亚复合物之一，主要参与MICOS复合物与线粒体外膜上的通道蛋白之间的相互作用进而促进线粒体接触位点（mitochondrialcontact site）的形成，同时也能促进嵴联接点结构的形成及稳定进而调控嵴膜的形成，但是Mic60与Mic19的相互作用方式一直没有揭示清楚。<br>　　为了进一步了解Mic60与Mic19的相互作用以及对整个MICOS复合体的重要性，本论文利用蛋白质的重组表达与纯化技术，在体外实验中初步分析了两者之间复杂的相互作用关系。首先分别将嗜热菌Myceliophthora thermophilaMic60和Mic19在大肠杆菌中进行原核表达，通过His-tag Pull-down方法和CO-elution等方法，在蛋白质水平上验证了二者的直接相互作用，鉴定了相互作用片段。在此基础上，通过亲和层析、离子交换层析及分子筛层析等蛋白质纯化方法，获得纯度较高状态较好的蛋白复合体及蛋白单体，并进行了初步的蛋白质结晶筛选。同时，本论文也利用氨基酸突变与二硫键交联实验，进一步分析了Mic19蛋白中CHCH结构域的闭合状态对Mic60-Mic19复合物相互作用的影响.<br>　　本课题对嗜热菌mtMic60-Mic19复合物的实验结果表明：不同于ctMic60-Mic19复合物的形成通过Mic60C-端mitofilin结构域与Mic19的CHCH结构域相互作用，研究发现mtMic60-Mic19复合物的形成通过Mic60蛋白的coiled-coil结构域（314-524）与Mic19的CHCH结构域相互作用，而mtMic60蛋白mitofilin结构域可能会阻碍复合物的结合。同时研究发现mtMic19的CHCH结构域的二硫键调控mtMic60-Mic19复合物间相互作用的强弱及稳定性，其中位于CHCH结构域的氨基酸残基C136和C147的作用很关键，它们形成的二硫键使CHCH结构域处于氧化闭合态，增强了Mic60和Mic19的相互作用，形成更稳定的Mic60-Mic19复合物；但它们在结构和功能上具有不对等性，C136S突变和C147S突变对Mic19的结构和功能以及稳定性的影响差别较大，对Mic60-Mic19复合物的亚基结合强弱也有不同程度的影响，其中C147S突变的影响比较显著。在晶体筛选中，Mic60截短体（314-524）形成了微小的蛋白晶体，但是难于重复与优化，需要进一步的结晶实验；本实验筛选出两组结合状态最好的复合物：Mic60_314-676-Mic19_FL和Mic60_314-524-Mic19_38-171，为进一步的结晶实验奠定了基础。