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摘要戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)所导致的戊型肝炎(Hepatitis E,HE)呈全球分布.HE通常情况下呈零星分布,但也可以引起爆发流行.爆发流行通常发生在发展中国家,对社会构成了严重威胁.HEV一般通过粪口途径进行传播,临床主要表现为急性黄疸型肝炎,也可以发生急性肝衰竭.具有基础肝脏疾病的病人感染戊肝后更容易引发重症肝炎,妊娠中晚期孕妇感染戊肝后死亡率可高达20%~30%.<br>　　传统观点认为,HE为急性自限性疾病,不会进展为慢性肝炎.然而,2008年,法国的Nassim Kamar等人首先报道了8例器官移植病人出现持续的转氨酶升高,组织学表现为慢性肝炎,血清HEV RNA持续阳性,从而揭开了慢性HE研究的序幕.慢性HE主要发生在接受器官移植、感染HIV伴CD4+T细胞计数下降、血液系统等恶性肿瘤接受化疗以及免疫力低下的的病人中.近十年来,越来越多的慢性HE被报道.然而,由于缺乏有效的细胞模型,关于慢性HE发生的机制尚不十分清楚.<br>　　我们课题组前期的研究发现,在A549细胞中,基因1型的HEV ORF3可以抑制TNF-α介导的NF-κB信号通路的激活.进一步研究发现,这一抑制作用是HEV ORF3通过信号通路中的TRADD-RIP1复合物抑制了TLR3受体介导的NF-κB的激活,并且RIP1的赖氨酸377的泛素化位点在这一过程中起着关键作用.上述研究可以部分的解释HE发生慢性化的原因.<br>　　本研究通过收集健康成年人外周血,用密度梯度离心法获得其中的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC).再加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant Human Granulocyte-macrophage Colony Stimulating Factor,rhGM—CSF)、重组人白细胞介素4(Recombinant Human Interleukin,rhIL-4)刺激后可以获得未成熟的DC.然后加入TNF使DC发育成熟.同时采用PCR技术合成基因1型HEV ORF3序列,随后构建到慢病毒过表达载体.然后用ORF3慢病毒感染DC细胞,ELISA检测DCs上清中细胞因子的变化,同时流式细胞术检测各组DC细胞的表面标志.用感染慢病毒2天后的各组DCs与T细胞共孵育,CCK8检测共孵育24h、48h时,T细胞数量的变化.<br>　　结果显示：加入了ORF3的DCs组与对照组相比,上清中INF-β、IL-4、IL-10、IL-12等的表达都显著降低.象征DC成熟的表面标志CD1a、CD80、CD83、CD86的表达也降低.并且加入了ORF3的DCs组其刺激T细胞增殖的能力也降低.<br>　　上述结果都表明,HEV ORF3可以抑制DC细胞的成熟和活化,降低其对T细胞的刺激,这可能是HE慢性化的重要原因之一.