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摘要高速逆流色谱（High-speed counter-current chromatography,HSCCC）起源于上个世纪80年代，已经被广泛用于天然产物、生物医药、农业食品及化工材料等领域的分离纯化研究中，逐渐发展成为一种高效而又成熟的分离纯化技术，具有制备量大、回收率高、成本低等优点。油橄榄叶(Olea europaea L.)为木犀科木犀榄属常绿乔木植物油橄榄的干燥叶，其主要活性成分为其中所含的多酚类化合物。目前，对油橄榄叶在药用、食用及日用等方面的研究正处于发展阶段，本论文主要采用离线二维高速逆流色谱技术对油橄榄叶中具有多种生理活性的多酚类化合物进行了分离制备并开展了相关研究，其主要研究内容如下：<br>　　1.本章节建立应用高速逆流色谱技术从油橄榄叶中快速分离制备橄榄苦苷的方法。以从甘肃省陇南地区采集的油橄榄叶为研究对象，系统考察了溶剂系统、流速、进样浓度等分离参数对高速逆流色谱分离效果的影响。<br>　　结果表明，以正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-水-氯仿（1：19：1：19：0.4,v/v）作为两相溶剂系统，上相作为固定相，下相作为流动相；在转速900rpm，流动相流速1.5mL·min-1，进样浓度20mg·mL-1条件下从油橄榄叶中成功分离得到橄榄苦苷，纯度可达到90%以上。该方法简便、快速、回收率高，为高效分离制备油橄榄叶中的橄榄苦苷提供了技术支持。<br>　　2.本章节以油橄榄叶中的2种主要有效成分-橄榄苦苷和木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷为目标化合物，系统考察HEMW（正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水系统）溶剂系统在体积比为1：19：1：19、1：9：1：9、1：9：2：8、1：9：3：7、1：6：1：6、1：5：1：5等不同比例时组成的9种不同极性的两相溶剂系统对目标化合物分离的影响，探讨目标化合物极性和溶剂系统极性对HSCCC分离油橄榄叶中多酚类化合物分离效果的影响。<br>　　结果表明，油橄榄叶中的多酚类化合物橄榄苦苷、木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷随着溶剂系统的极性的减小，其分离效果呈现先增强后减弱的趋势，在最佳的分离条件下，分离制备所得橄榄苦苷、木犀草素-7'-O-β-D-葡萄糖苷的纯度按照HPLC归一化法检测，分别为90.8%和92.5%。本实验结果为HSCCC溶剂系统快速筛选及提高HSCCC在复杂体系中分离制备目标化合物的效率提供了技术支持。<br>　　3．本章节主要采用由HEMW（正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水）系统组成新型的基于9×9表溶剂系统筛选的方法应用于HSCCC分离油橄榄叶中多酚类化合物橄榄苦苷、木犀草素-4-O-β-D-葡糖糖苷及羟基酪醇。在HEMW系统按照不同比例组成的9×9表中随机地选择4种溶剂系统，测定3种目标物在4种溶剂体系中的K值并在LogK值和溶剂系统数之间构建相关的线性关系，通过线性关系筛选出最佳溶剂系统HEMW(1.5：8.5：1.8：8.2,v/v)进行HSCCC分离油橄榄叶并优化了流速、转速及进样量等分离条件。<br>　　以HEMW(1.5：8.5：1.8：8.2,v/v)为溶剂系统，流速为1.5mL·min-1、转速为950rmp、进样量为20mg·mL-1从500mg油橄榄叶提取物中分离得到45.8mg橄榄苦苷、17.7mg木犀草素-4'-O-β-D-葡萄糖苷及6.8mg羟基酪醇且三种化合物纯度都大于90%。本研究体现了9×9表溶剂系统筛选在HSCCC分离中的高效性和可行性，极大地提高了HSCCC分离时溶剂筛选的效率。