检索历史 清除

摘要目的：分析异基因造血干细胞移植（allogenic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）后患者Notch表达情况，了解急性移植物抗宿主病（Acute Graft-versus-Host-Disease,aGVHD）与Notch信号的关系。<br>　　通过建立小鼠aGVHD模型，观察抑制Notch1信号后小鼠aGVHD的发病情况和各靶器官组织病理改变，并通过体内、外实验检测分析宿主抗原递呈细胞（Antigen Presenting Cells,APCs）和供者T细胞的功能，以了解Notch1信号的抑制与aGVHD的关系。<br>　　方法：收集接受HSCT治疗的不同类型血液病患者的外周血标本，包括allo-HSCT和自体造血干细胞移植（autogenic hematopoietic stem cell transplantation,auto-HSCT）患者，临床观察移植后aGVHD发生、发展情况。同时收集正常人群样本作为对照。分离外周血单个核细胞（Perpheral blood mononuclear cells,PBMCs），提取RNA后采用实时定量PCR进行Notch1和Hes-1mRNA定量检测。<br>　　建立C57BL/6（B6,H-2b Male）→BALB/c（H-2d Female）MHC不相合小鼠异基因骨髓移植模型（小鼠aGVHD模型），以Notch1信号抑制剂γ分泌酶抑制剂（DAPT）抑制Notch1信号，通过体外和体内实验了解Notch1信号抑制后aGVHD发生、发展的情况，包括移植后小鼠体重、aGVHD评分和aGVHD发病时间等；并通过流式细胞仪检测小鼠骨髓细胞和脾细胞DCs和T细胞免疫表型，了解抑制Notch1信号后受体小鼠APCs和T细胞功能变化。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠脾细胞IFN-γ和TNF-α水平，了解aGVHD主要效应细胞因子表达情况，探讨抑制Notch1信号与aGVHD的关系。<br>　　结果：allo-HSCT患者Notch1mRNA和Notch靶基因Hes-1mRNA表达较auto-HSCT患者和正常人群高。<br>　　将C57BL/6小鼠骨髓单个核细胞4.5×107和脾细胞2.25×107输入经7.5Gy全身照射的BALB/c小鼠，成功建立小鼠aGVHD模型。20例小鼠allo-HSCT后存活时间均大于10天，aGVHD发病率为100%，发病中位时间为11天。体内、外DAPT处理组和对照组小鼠移植后体重下降百分比分别为15.72±5.06、19.72±7.31、24.2±3.32和24.06±2.05，体内DAPT处理小鼠体重下降程度较对照组小鼠明显减少。aGVHD最高评分分别为：7.2±3.834、3±0.0、8.4±2.191和7.6±3.286分；出现aGVHD中位时间分别为：10.2±1.304、13.8±1.924、10.4±1.949和10±1.414天，提示：体内DAPT处理小鼠出现aGVHD中位时间较对照组晚，aGVHD评分较对照组小鼠明显降低。Notch信号受抑小鼠骨髓和脾脏单个核细胞CD11c、CD80、CD86和PD-L1/CD274等APCs抗原分子比例较对照组下降。其次，T细胞表面抗原分子如CD3、CD4、CD25、CD44和Foxp3比例较对照组明显升高。小鼠骨髓和脾脏单个核细胞TNF-α水平较对照组明显下降，IFN-γ表达明显升高。<br>　　结论：抑制Notch1信号通路可一定程度减轻小鼠aGVHD，其机制可能与下调抗原提呈细胞活性和功能、诱导T细胞向Th2或调节性T细胞分化相关。