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UC-MSCs对脓毒症所致ALI的免疫干预作用

摘要目的:通过盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型,观察脓毒症大鼠的CD4+T淋巴细胞百分率、Th1/Th2、CD4+T淋巴细胞凋亡百分率、血浆炎症因子及其肺组织HE染色的变化,探究人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对脓毒症所致急性肺损伤(ALI)的免疫干预作用。<br>  方法:按随机数字表法将208只SD大鼠分为正常对照组(n=8)、假手术组(n=40)、脓毒症模型组(n=80)、干细胞治疗组(n=80)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)制备脓毒症模型。干细胞治疗组于制模后1h腹膜注射第三代UC-MSCs(2×106)1mL;假手术组、脓毒症模型组给予等量生理盐水。假手术组、脓毒症模型组、干细胞治疗组分别取8、16、16只,观察各组大鼠72小时内生存率。制模后12、24、48和72小时经下腔静脉取血,使用流式细胞仪(FACS)检测全血细胞中CD4+T淋巴细胞百分率、Th1/Th2比值及其CD4+T淋巴细胞凋亡百分率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁徙率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素-10(IL-10)水平,处死大鼠后取肺组织行HE染色。<br>  结果:脓毒症模型组与干细胞治疗组大鼠72小时生存率无明显差异(P>0.05)。脓毒症模型组术后12小时CD4+T淋巴细胞百分比、Th1/Th2比值均显著高于假手术组(P<0.01),随时间延长有所降低,并于48、72小时显著低于假手术组(P<0.01);血浆炎性因子水平均于CLP术后12小时显著高于假手术组(P<0.01),TNF-α、IL-10于CLP术后48小时达高峰后有所降低,而HMGB1持续升高至72小时。与脓毒症模型组比较,干细胞治疗组术后12、24小时CD4+T淋巴细胞百分比、术后12、24、48小时Th1/Th2比值及术后12、24、48、72小时TNF-α和HMGB1均显著降低(P<0.01),术后12、24、48、72小时IL-10水平显著升高(P<0.01),术后12、24小时CD4+T细胞凋亡百分率有所降低(P<0.05),并于48、72小时显著低于脓毒症模型组(P<0.01)。脓毒症模型组较假手术组肺组织HE染色提示:随着时间的推移,脓毒症模型组肺内正常肺泡逐渐消失并融合成大小不一的肺大泡,大量炎性细胞浸润、肺内出血、肺间质水肿,肺泡间隔显著增厚。干细胞治疗组较脓毒症模型组肺组织HE染色提示:干细胞治疗组肺泡大小较均一,炎性细胞浸润、肺内出血、间质水肿、肺泡间隔增厚均明显减轻。<br>  结论:1、UC-MSCs并未改善脓毒症大鼠72小时生存率。2、UC-MSCs可以减轻脓毒症早期过强的炎症反应,改善脓毒症早期以促炎为主的免疫失衡。3、UC-MSCs可抑制脓毒症所致的淋巴细胞凋亡,避免因淋巴细胞过度减少而导致的免疫力下降。4、UC-MSCs可减少脓毒症导致ALI对肺的损伤程度。

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