检索历史 清除

摘要目的：复制博莱霉素诱导的动物肺纤维化模型，优化造模条件，在此基础上研究金贝口服液对博莱霉素诱导动物肺纤维化的治疗效果，并从促纤维化细胞因子、与纤维化相关的基因蛋白水平表达等方面探讨其作用机制。<br>　　方法：1.采用经气管给药博莱霉素诱导SD大鼠、C57BL/6小鼠肺纤维化作为动物模型。C57BL/6小鼠经不同浓度博莱霉素造模，四周后从死亡时间、死亡率、病变程度等方面进行模型评价，选定小鼠最佳造模剂量。<br>　　2.在成功复制博莱霉素诱导的动物肺纤维化模型基础上，采用灌胃不同剂量金贝口服液对动物进行治疗，通过动物宏观表征、HE与Masson染色、Elisa检测、蛋白印迹法多种技术手段，多层次评价治疗效果，整合宏观指标与微观指标，确认金贝口服液对博莱霉素诱导动物肺纤维化的治疗效果与作用机制。<br>　　结果：1.博莱霉素诱导C57BL/6小鼠肺纤维化的最佳造模剂量为1.5mg/kg。<br>　　2.通过动物模型宏观体征表现和生化指标相结合，确定博莱霉素诱导的动物肺纤维化模型具有肺系数变大，肺泡壁明显增厚，肺泡变小，胶原蛋白显著增加的变化特征；通过Elisa法检测，其肺组织中HYP、TGF-β、TNF-α以及PDGF生物分子的表达水平明显升高；采用WB检测得出肺组织中Collagen I、α-SMA、Vimentin的表达水平升高，E-cadherin的表达水平降低，初步构建宏观与微观多尺度博莱霉素诱导动物肺纤维化模型的判别体系。<br>　　3.不同剂量的金贝口服液对博莱霉素诱导的动物肺纤维化均具有一定的治疗效果，可降低肺泡壁厚度，增大肺泡，减少胶原蛋白的沉积，病理切片可以明显看出用药组肺泡变大，肺泡壁变薄，炎症程度减弱，病变有所好转。酶联免疫检测动物肺组织中细胞因子的变化，实验结果表明用药组HYP、TGF-β、TNF-α与PDGF的含量均有所降低，蛋白印记法检测SD大鼠肺组织中E-cadherin、Collagen I、α-SMA与Vimentin蛋白表达水平，用药组与模型组相比E-cadherin含量升高，Collagen I、α-SMA与Vimentin含量降低。<br>　　综合各项实验结果，可以得出金贝口服液对博莱霉素诱导的动物肺纤维化具有治疗效果，其中SD大鼠的最佳治疗剂量为7.2ml/只/天，C57BL/6小鼠的最佳治疗剂量为0.3ml/只/天。<br>　　结论：在成功复制博莱霉素诱导动物肺纤维化模型的基础上，初步构建宏观与微观相结合的博莱霉素诱导动物肺纤维化模型的判别系统，与模型组相比，金贝口服液用药组肺组织炎症与纤维化程度均有所减轻；模型组与对照组相比，HYP、TGF-β、TNF-α与PDGF的含量明显升高（P＜0.01），Collagen I、α-SMA和Vimentin蛋白表达水平显著升高（P＜0.01），E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P＜0.01）；与模型组相比，金贝用药组动物的肺组织HYP、TGF-β、TNF-α与PDGF的含量明显降低（P＜0.01），Collagen I、α-SMA和Vimentin蛋白表达水平降低（P＜0.01），E-cadherin蛋白表达水平升高（P＜0.01）。<br>　　结果发现，金贝口服液可显著降低模型组大鼠肺组织中HYP、TGF-β、TNF-α、PDGF的含量并能抑制CollagenⅠ、α-SMA与Vimentin蛋白增加、降低E-cadherin蛋白的表达（p＜0.01）。金贝口服液可能通过抑制TGF-β含量升高，减少肺部炎性细胞、成纤维细胞与肌成纤维细胞的增加，降低胶原蛋白的沉积，从而抑制肺泡壁增厚，肺泡损伤。