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摘要目的：探究慢性低氧肺高压大鼠肺微血管内皮细胞(Pulmonary Microvascular Endothelial Cells，PMVECs)上TRPV4通道及内皮通透性变化，明确TRPV4通道功能变化与内皮细胞通透性改变的相关性。<br>　　方法：①清洁级雄性SD大鼠随机分为2组：正常对照组（CON）和慢性低氧组（CH）：大鼠饲养于氧分压为9.5%～10.5%的密封有机玻璃箱内3W，3W后右心导管检查肺动脉平均压（RVSP）、右心重量指数（RVMI），并用石蜡包埋切片HE染色法鉴定低氧模型是否成功；②组织块贴壁法培养原代CON组和CH组大鼠PMVECs,并用免疫荧光法及FITC-BSI结合试验鉴定PMVECs；③透射电镜检测CH组大鼠PMVECs间紧密连接变化；④用Millicell ERS-2测transwell小室电阻变化，确定单层的PMVECs汇合长满，再用异硫氰酸荧光素（FITC）标记葡聚糖法（Pd法）检测CON组与CH组大鼠PMVECs通透性，明确CH组大鼠肺微血管内膜通透性改变；另外再检测TRPV4的激动剂和抑制剂对单层PMVECs通透性的干预，明确TRPV4与PMVECs通透性改变间的相关性；⑤使用实时定量RT-PCR法检测TRPV4、TJ相关蛋白Occludin、ZO-1等在CON组和CH组大鼠肺微血管内膜中mRNA表达量的差异；⑥Western-blot检测PMVECs膜上主要钙离子通道TRPV4和主要的TJ相关蛋白Occludin蛋白表达水平，明确CH组PMVECs中TRPV4及TJ相关蛋白表达变化；⑦用Fluo-3荧光测Ca2+方法，测定CON及CH组大鼠PMVECs中[Ca2+]i的水平，明确CH-PH大鼠PMVECs基础该钙的改变；并检测TRPV4的特异性激动剂和抑制剂对PMVECs[Ca2+]i的影响，明确CH组基础钙的变化与TRPV4通道的相关性。<br>　　结果：与正常组相比，①CH-PH模型大鼠的RVSP/mmHg（CON：27±2.61,CH：49±3.67,P＜0.01）及对应的RVMI(CON：27.8±1.9,CH：47.3±2.3)均显著增高，肺小动脉血管壁平滑肌层明显增厚，管腔狭窄，提示CH-PH模型制备成功；②肺边缘组织块贴壁培养24h有内皮细胞迁出，48h后布满组织块周围，62h后去组织，1w左右长满培养瓶底70%以上，细胞形态从刚开始迁出的多边形变为铺路石样生长。免疫荧光技术显示vWF和CD31表达阳性，且FITC-BSI结合实验显示胞浆呈黄绿色荧光，提示成功培养出高纯度PMVECs；③透射电镜结果显示CH组大鼠PMVECs间紧密连接被破坏，且较CON组明显增大，提示CH组大鼠肺微血管内膜通透性升高；④TER法（transmembrane electrical resistance，TER）确定PMVECs汇合成单层后，用FITC-葡聚糖法检测通透性显示CH组Pd值(μl/cm2/h)显著增高（CON：12.5±1.87，CH：26.2±3.6，P＜0.01），GSK101预处理再测Pd值，显示Pd值显著增高，而HC-067则显著拮抗了GSK101引起效应，提示CH组PMVECs的通透性显著增高，且与PMVECs胞膜上的TRPV4密切相关。⑤CH-PH模型大鼠PMVECs中TRPV4、TJ相关蛋白Occludin、ZO-1等的mRNA表达和蛋白表达水平变化显著，其中mRNA表达水平：Occludin显著降低（CON：1.12±0.60，CH：0.19±0.13，P＜0.01）、ZO-1mRNA的表达也降低（CON：1.10±0.15，CH：0.35±0.10，n＞6，P＜0.01）、TRPV4显著增高（CON：1.02±0.25，CH：1.67±0.53，P＜0.05），另外蛋白表达水平：与mRNA表达水平一致，Occludin蛋白表达水平也显著降低，TRPV4蛋白表达水平显著增高，以上结果提示CH大鼠PMVECs胞膜上TRPV4mRNA及蛋白表达水平显著上调，而TJ相关蛋白表达则下降；⑥CH组大鼠PMVECs中胞内钙（CON：107±6nM，n＞16；CH：137±30nM，p﹤0.05）显著升高，提示CH-PH模型组大鼠PMVECs中基础钙明显增高；⑧此外，为了进一步了解PMVECs中TRPV4与血管通透性增加的内在联系，用TRPV4特异性激动剂GSK101测量[Ca2+]i同时检测它对血管通透性的影响，结果显示CH组的钙内流显著高于CON组，且PMVECs的通透性均显著增加；TRPV4特异性抑制剂HC-067对GSK101诱导引起的钙内流和通透性有显著拮抗作用。<br>　　结论：①慢性低氧诱导PH大鼠肺微血管内皮细胞通透性增高，其主要的TJ相关蛋白Occludin、ZO-1等表达下调。<br>　　②慢性低氧诱导PH大鼠肺微血管内皮细胞TRPV4通道mRNA/及蛋白表达水平及功能水平均上调。<br>　　③TRPV4活化可显著增加单层肺微血管内皮细胞的通透性。<br>　　本研究为肺高压发病机制的研究及治疗提供了全新的研究思路。