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摘要目的:本实验通过检测急性淋巴细胞白血病细胞JARID1B、miR-137的表达,在体外研究JARID1B、miR-137在急性淋巴细胞白血病中的功能,并初步探讨可能发病机制,为急性淋巴细胞白血病治疗提供新的靶点.<br>　　方法:1、Western Blot检测组蛋白H3K4me2、H3K4me3、JARID1B蛋白;荧光定量PCR检测JARID1B、miR-137mRNA检测在30例急性淋巴细胞白血病患者骨髓原代细胞及6株急性淋巴细胞白血病细胞系(MOLT-4、CA46、Daudi、Jurkat、NALM-6、BALL-1)细胞中的表达水平,选用12例健康志愿者的外周血单个核细胞作为对照组.2、构建RNA干扰腺病毒载体adenovirus-JARID1B-RNAi-GFP(JARID1B shRNA)及过表达腺病毒载体Adenovirus-JARID1B-GFP(JARID1B-GFP)转染急性T淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4细胞和急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1细胞,荧光定量PCR检测JARID1BmRNA,Western Blot检测JARID1B蛋白的表达,MTT法观察转染后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率的变化.3、通过转染miR-137inhibitor下调及miR-137mimic上调MOLT-4和BALL-1细胞miR-137,荧光定量PCR检测JARID1BmRNA,Western Blot检测JARID1B蛋白的表达,MTT法观察其对细胞增殖的影响.4、应用生物信息学软件预测调控JARID1B的miRNA,构建了含有野生型3'UTR的JARID1B报告质粒(JARID1B-3'UTR-WT),和突变型3'UTR的JARID1B报告质粒(JARID1B MT-3'UTR),将这报告质粒分别与miR-137mimic共同转染MOLT-4、BALL-1细胞,检测荧光素酶的活性,进行靶基因验证;5、进行JARID1B恢复和干扰表达实验,分别检测JARID1B-GFP和miR-137mimic共转染,ARID1B-shRNA和miR-137inhibitor共转染对BALL-1细胞增殖及凋亡的影响,进一步验证miR-137与JARID1B的关系.<br>　　结果:1、健康志愿者相比,急性淋巴细胞白血病患者骨髓原代细胞及6株细胞系细胞中组蛋白H3K4me3、H3K4me2水平存在明显的低表达(P<0.0001);JARID1B的蛋白及mRNA存在高表达(P<0.0001);miR-137mRNA的低表达(P<0.0001),miR-137mRNA与JARID1B蛋白存在负相关(临床标本:R=0.7277,P<0.0001;细胞系:R=0.9004,P<0.0001).2、干扰腺病毒JARID1B shRNA及过表达腺病毒JARID1B-GFP能高效转染MOLT-4细胞和BALL-1细胞;JARID1B shRNA下调MOLT-4和BALL-1细胞JARID1B基因mRNA及蛋白的表达,上调组蛋白H3K4me3、H3K4me2水平;抑制细胞增殖,诱导细胞的凋亡,与对照组相比,差别有统计学意义,P<0.0001.JARID1B-GFP上调MOLT-4和BALL-1细胞JARID1B基因mRNA及蛋白表达,下调组蛋白H3K4me3、H3K4me2水平;与对照组相比,能促进BALL-1细胞增殖(P<0.0001),抑制BALL-1细胞凋亡(P=0.0325),但是在MOLT-4细胞中,未出现细胞增殖变化(P=0.6646),及细胞凋亡率的变化(P=0.2259).3、向MOLT-4和BALL-1细胞转染miR-137mimic,可下调MOLT-4和BALL-1细胞JARID1B基因的mRNA及蛋白表达,抑制细胞增殖,与对照组相比,差别有统计学意义,P<0.0001;向MOLT-4和BALL-1细胞转染miR-137inhibitor,可上调MOLT-4和BALL-1细胞JARID1B基因的mRNA及蛋白表达,与对照组相比,能促进BALL-1细胞增殖(P<0.0001),但是在MOLT-4细胞中,未出现细胞增殖的增加(P=0.5832).4、miRanda等软件预测JARID1B可能是miR-137作用的靶基因之一.荧光素酶的活性报告实验结果表明,与对照组相比,转染miR-137mimic能够抑制共转染的野生型3'UTR的JARID1B-3'UTR-WT荧光素酶活性(MOLT-4:P=0.0069;BALL-1:P=0.0002),而不能抑制共转染的突变型3'UTR的JARID1B-3'UTR-Mut荧光素酶活性,支持JARID1B是miR-137作用的靶基因之一的预测.5、过表达腺病毒JARID1B-GFP部分抵消miR-137mimic对BALL-1细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;而干扰腺病毒载体JARID1B shRNA也可以部分抵消miR-137inhibitor对BALL-1细胞促进增殖和抑制凋亡的作用.<br>　　结论:1、急性淋巴细胞白血病中组蛋白H3K4me2、H3K4me3水平较低.2、JARID1B在急性淋巴细胞白血病中高表达,下调其表达可抑制白血病细胞增殖及促进凋亡,而上调其表达可促进细胞增殖及抑制凋亡,JARID1B可能是一个癌基因,与急性淋巴细胞白血病发病相关.3、miR-137在急性淋巴细胞白血病中低表达,上调其表达可抑制细胞增殖,而下调其表达促进细胞增殖,miR-137可能是一个抑癌基因.4、JARID1B是miR-137的靶基因之一,miR-137可以通过下调JARID1B的表达,抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖、及诱导细胞凋亡.