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摘要目的：<br>　　通过转录组测序和生物信息学技术，筛选出与特发性肺纤维化（IPF）相关的差异表达的lncRNA，并进行验证其可否成为IPF相关的分子靶点，进而在动物水平及细胞水平研究该lncRNA的功能，并探讨其在IPF中可能的作用机制。<br>　　方法：<br>　　1. （1）根据诊断标准收集年龄大于60岁的IPF患者的外周血标本和年龄大于60岁的正常对照血液标本各4例，通过转录组测序技术检测外周血的lncRNAs，通过生物信息学技术分析差异表达lncRNAs和mRNAs情况。（2）再次收集IPF组30例和对照组30例，留取外周血提取RNA，进行PCR验证前期筛选出的lncRNAs，比较两组之间lncRNAs的表达情况,选出两组之间变化比较大的lncRNA进行研究。同时验证该lncRNA和与其相关的mRNA的表达情况。（3）同时收集不同年龄的健康人群的外周血标本100例，20-30岁20例，30-40岁20例，40-50岁20例，50-60岁20例，大于60岁20例，通过PCR检验AP003419.16、RPS6KB2在不同年龄人群的表达。<br>　　2. 动物水平：通过生物信息学分析发现AP003419.16、RPS6KB2在人与鼠之间的同源性很高。我们选用6周和6月龄的雄性C57BL/6小鼠进行实验，6周龄小鼠采用随机数字法分为正常组（QC组）、青年肺纤维化组（QM组）、青年肺纤维化+雷帕霉素组（QL组），每组12只。6月龄小鼠采用随机数字法分为正常老龄组（LC组）、老龄肺纤维化组（LM组）、老龄肺纤维化+雷帕霉素组（LL组），每组12只。HE染色观察肺组织损伤情况，Masson染色观察肺纤维化情况，原位杂交方法检测AP003419.16在肺组织的表达情况。PCR方法检测外周血和肺组织AP003419.16、RPS6KB2表达水平。Western blot方法检测肺组织P-P70S6K蛋白的表达情况。<br>　　3.细胞水平：（1）培养A549细胞，分组：A549组、TGF-β1干预组、A549组（7d）、TGF-β1干预（7d）组。通过β-半乳糖苷酶实验法检测细胞衰老。PCR检测AP003419.16和RPS6KB2的表达。Western blot方法检测P-P70S6K的表达。（2）通过siRNA干扰掉AP003419.16，根据实验分为6组：A549组、TGF-β1干预组（A549TGF-β1组）、阴性siRNA组（A549 阴性siRNA组）、阴性siRNA+TGF-β1干预组（A549 阴性siRNA+TGF-β1组）、阳性siRNA组（A549 阳性siRNA组）、阳性siRNA+TGF-β1干预组（A549 阳性siRNA+TGF-β1组）。PCR检测AP003419.16和RPS6KB2的表达。<br>　　结果：<br>　　1. （1）转录组测序结果发现在IPF中存在差异表达的lncRNAs。与对照组相比， IPF中差异表达的lncRNA共有1699条。GO分析发现IPF中相关的靶基因功能，如参与了调节B细胞受体信号通路、调节钙通道活性等，Pathway分析发现IPF相关的靶基因相关的信号通路主要有mTOR信号通路、ErbB信号通路等。IPF中差异表达的lncRNA与邻近蛋白编码基因的位置关系为正义、反义、基因间所占的比例比较大。根据测序的结果及筛选条件，我们选出3个lncRNAs：AP003419.16、RASSF1-AS1、RP11-20I23.8。（2）扩大样本IPF组30例及对照组30例进行PCR验证这3个lncRNAs，结果发现AP003419.16变化倍数比较大，我们将选用AP003419.16进行下一步研究，生物信息学分析发现差异表达的mRNA为RPS6KB2，是AP003419.16的邻近基因。PCR验证后发现AP003419.16和RPS6KB2在IPF中高表达，而在对照组中低表达（P<0.05）。（3）AP003419.16、RPS6KB2的表达随着年龄的增长而增加（P<0.05）。<br>　　2. HE染色和Masson染色发现肺间质增厚和纤维化程度在LM组最明显，QL组较QM组好转，LL组较LM组好转。原位杂交结果显示，AP003419.16在LC组较QC组表达增高（P<0.05），QM组较QC组表达量增高，LM组较LC组表达量增高， LM组表达量最高（P<0.05），QL组较QM组表达量减少，LL组较LM组表达量减少（P<0.05）。PCR 检测C57BL/6小鼠外周血及肺组织发现AP003419.16、RPS6KB2在LC组较QC组表达增高（P<0.05），QM组较QC组表达量增高，LM组较LC组表达量增高，LM组表达量最高（P<0.05），QL组较QM组表达量减少，LL组较LM组表达量减少（P<0.05）。Western Blot检测各组肺组织中P-P70S6K的表达结果与基因RPS6KB2表达结果一致（P<0.05）。<br>　　3. 倒置相差显微镜观察A459细胞，TGF-β1干预7天后，A459细胞形态由原来的多角形逐渐变为长梭形，并且发现TGF-β1干预7天后，β-半乳糖苷酶着色阳性的细胞明显增多。（1）PCR结果显示AP003419.16和RPS6KB2的表达在TGF-β1干预组较A549组增加（P<0.05）。A549组（7d）较A549组增加（P<0.05）。TGF-β1干预（7d）组表达量最多（P<0.05）。Western Blot检测各组肺组织中P-P70S6K的表达结果与基因 RPS6KB2 表达结果一致（ P<0.05 ）。（ 2 ）生物信息学分析发现AP003419.16和RPS6KB2之间的关系可能存在重叠关系。PCR结果发现利用siRNA干扰AP003419.16后，RPS6KB2基本不表达。<br>　　结论：<br>　　1.转录组测序结果显示在IPF患者外周血中存在差异表达的lncRNAs，其中AP003419.16和它的邻近基因mRNA RPS6KB2表达在IPF中高表达，而在对照组中低表达。AP003419.16和RPS6KB2随着年龄的增长而表达增加。<br>　　2.动物模型中的外周血及肺组织中均发现AP003419.16和RPS6KB2与衰老及IPF相关。<br>　　3.生物信息学分析发现AP003419.16和RPS6KB2之间的关系可能存在重叠关系。细胞水平发现利用siRNA干扰AP003419.16后，RPS6KB2基本不表达。我们推测长链非编码RNA AP003419.16可能通过调控邻近基因RPS6KB2在衰老相关特发性肺纤维化的发生中发挥潜在的分子靶点。