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摘要目的:<br>　　分析补体系统中经典途径、替代途径、甘露糖结合凝集素途径中多个补体成分在2型糖尿病肾病大鼠肾脏中的表达水平，探讨补体系统在2型糖尿病肾病中的致病作用。<br>　　方法:<br>　　1、建立2型糖尿病模型及2型糖尿病肾病模型：24只5周龄的雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、2型糖尿病组（DM组）及2型糖尿病肾病组（DN组）。对照组给予普通饲料喂养，DM组、DN组给予高脂高糖饲料喂养以诱导胰岛素抵抗。8周后，大鼠禁食不禁水12小时，DM组、DN组予1%STZ 30mg/kg腹腔注射一次，对照组予腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液一次，以72 h后连续三天随机血糖≥16.7 mmol/L为2型糖尿病模型造模成功。大鼠出现糖尿病后，DN组则继续给以高脂高糖饲料喂养8周以建立糖尿病肾病模型，以24h尿白蛋白排泄量≥30mg/24h为出现早期肾脏病变标准。<br>　　2、测量大鼠体重、肾重，用罗氏血糖仪测大鼠末梢血糖（光化学法），采用胰岛素测定ELISA试剂盒测空腹胰岛素、尿白蛋白ELISA试剂盒测24小时尿白蛋白浓度，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR=空腹胰岛素×空腹血糖/22.5）。<br>　　3、大鼠肾脏组织行苏木素-伊红染色、过碘酸-希夫染色观察肾脏组织形态改变，计算系膜指数（系膜指数=系膜基质面积/肾小球面积×100%）、小动脉硬化指数（小动脉硬化指数=管壁面积/(管壁面积+管腔面积)）、管型面积百分比（管型面积百分比=管型面积/总视野面积×100%）。<br>　　4、免疫组化及western blot检测各组大鼠肾脏补体系统多成分的表达水平及足细胞标志蛋白nephrin表达水平。<br>　　结果:<br>　　1、STZ注射前，DM组及DN组体重较对照组均升高（525.6±35.0g vs. 477.6± 25.6g，P=0.01；541.4±39.7g vs. 477.6±25.6g，P=0.001），DM组及DN组HOMA-IR较对照组均高（2.76±1.20 vs.1.50±0.13，P=0.006；2.40±1.27 vs.1.50±0.13，P=0.036），说明DM组及DN组出现胰岛素抵抗。STZ注射后1周，DM组及DN组血糖较对照组均高（23.11±2.78mmol/L vs.6.06±0.92mmol/L，P＜0.001；24.25± 2.80mmol/L vs.6.06±0.92mmol/L，P＜0.001），且DM组及DN组HOMA-IR较对照组均高（5.88±3.09 vs. 1.59±0.13，P＜0.001；5.83±2.07 vs.1.59±0.13，P＜0.001）。至DN模型造模结束后，DN组24h尿白蛋白量较对照组及DM组均高（111.64± 25.61mg vs. 9.74±2.08mg，PP＜0.001；111.64±25.61mg vs. 18.09±6.05mg，PP＜0.001），并且DN组的肾重/体重（mg/g）较对照组及DM组均升高（4.94±1.00 vs. 2.79±0.24，P＜0.001；4.94±1.00 vs. 3.02±0.20，P＜0.001）。<br>　　2、HE染色及PAS染色结果显示：DN组系膜指数较对照组及DM组均高(16.25± 1.67%vs. 13.62±1.41%，P=0.003；16.25±1.67%vs. 14.00±1.69%，P=0.01）。DN组肾小管管型面积百分比较对照组及DM组均高(1.66±1.83%vs. 0，P=0.005；1.66 ±1.83%vs. 0，P=0.005）。DN组肾小动脉硬化指数较对照组及DM组均高(0.79± 0.03 vs. 0.76±0.03，P=0.024；0.79±0.03 vs. 0.75±0.03，P=0.011）。以上指标在DM组与DN组中差异无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　3、免疫组化（IHC）阳性表达积分光密度（IOD）(×104)及western blot条带相对灰度值结果显示：肾脏补体成分C1q IOD在DN组中较对照组及DM组升高(10.38± 4.15 vs. 5.69±3.86，P=0.01；10.38±4.15 vs. 3.37±9.76，P＜0.001)。MBL IOD在DN组中较对照组及DM组升高(6.79±4.56 vs. 2.39±0.94，P=0.004；6.79±4.56 vs. 2.92±0.8，P=0.01)，WB条带相对灰度值在DN组中较对照组及DM组升高(3.91± 1.13 vs. 0.83±0.39，＜0.001；3.91±1.13 vs. 1.34±1.05，P=0.004)。MASP-2 IOD在DN组中较对照组及DM组升高(12.50±3.10 vs. 3.27±2.78，P＜0.001；12.50±3.10 vs. 4.72±5.16，P＜0.001)，WB条带相对灰度值在DN组中较对照组及DM组升高(3.91±1.13 vs. 0.83±0.39，P＜0.001；3.91±1.13 vs. 1.34±1.05，P＜0.001)。B因子IOD在DN组中较对照组及DM组升高(8.35±5.05 vs. 1.84±1.45，P=0.001；8.35 ±5.05 vs. 2.67±1.91，P=0.002)。C3 IOD在DN组中较对照组及DM组升高(2.22± 1.23 vs. 1.13±0.86，P=0.031；2.22±1.23 vs. 1.02±0.62，P=0.018)，WB条带相对灰度值在DN组中较对照组及DM组升高(1.77±0.94 vs. 0.66±0.33，P=0.002；1.77 ±0.94 vs. 0.96±0.77，P=0.036)。C5b-9 IOD在DN组中较对照组及DM组升高(4.29 ±1.80 vs. 1.64±0.79，P＜0.001；4.29±1.80 vs. 1.69±0.68，P＜0.001)。而补体成分在对照组及DM组中的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　4、免疫组化结果显示C1q、MBL、MASP-2、B因子、C5b-9主要表达于肾小管部位，C3则主要集中表达在肾小球。<br>　　5、免疫组化结果显示足细胞标志蛋白nephrin IOD在各组肾小球表达差异无统计学意义(P＞0.05)。<br>　　6、相关性分析结果显示24h尿白蛋白量与C1q（r=0.580，P=0.003）、MBL（r=0.640， P=0.001）、MASP-2（r=0.751，P＜0.001）、B因子（r=0.728，P＜0.001）、C5b-9 （r=0.718，P＜0.001）呈正相关。系膜指数与MBL（r=0.457，P=0.025）、B因子（r=0.429，P=0.036）、C3（r=0.410，P=0.046）、C5b-9（r=0.498，P=0.013）呈正相关。管型面积百分比与C1q（r=0.431，P=0.035）、MBL（r=0.548，P=0.006）、B因子（r=0.553，P=0.005）呈正相关。小动脉硬化指数与C1q（r=0.481，P=0.017）、MBL（r=0.465，P=0.022）、MASP-2（r=0.494，P=0.014）、B因子（r=0.486，P=0.016）呈正相关。<br>　　结论:<br>　　1、补体系统激活的三条途径的多个补体成分在2型糖尿病肾病肾脏中的表达水平增高。且补体成分高表达与肾脏病变相关。<br>　　2、不同补体途径在肾小球和肾小管损伤中可能发挥不同的作用。