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miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学特性的影响

摘要Pde4d基因位于小鼠13号染色体上,其编码产物PDE4D(磷酸二酯酶4d)可以特异性降解 cAMP,因而细胞的生命活动中发挥重要作用。miR-1904 定位于小鼠Pde4d第8内含子内,是一种内含子microRNA。鉴于目前对miR-1904靶基因及功能研究较少,本论文以miR-1904为研究对象,分析了其在小鼠肝癌细胞中的表达及与宿主基因Pde4d的靶向关系,并进一步研究了miR-1904对Hepa1-6细胞生物学行为的影响。<br>  首先本文鉴定了miR-1904与宿主基因Pde4d之间的靶向关系。首先在Hepa1-6细胞转染miR-1904 mimics,外源性上调miR-1904,定量PCR和western blot检测显示Pde4d的mRNA和蛋白质水平都出现了显著性下调;而转染miR-1904 inhibitor后 Pde4d 表达出现显著性上调。随后双荧光素酶报告实验和挽救实验进一步证明Pde4d是miR-1904的靶基因。<br>  其次本文研究了miR-1904对小鼠肝癌细胞生物学表型的影响。在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中上调和抑制miR-1904的表达,检测到miR-1904抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭。细胞周期和细胞凋亡实验结果进一步证实了miR-1904是通过促进细胞凋亡而并非改变细胞周期来影响细胞增殖的。体内成瘤实验表明过表达miR-1904 的肿瘤无论是生长速率还是肿瘤质量都出现显著性下降,说明miR-1904具有肿瘤抑制子的功能。<br>  综上所述,本研究验证了Pde4d 是miR-1904的靶基因之一,miR-1904表达上调对小鼠肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和体内成瘤能力具有抑制作用,并促进细胞凋亡。说明miR-1904可能作为抑癌miRNA在肿瘤发生和发展中起到作用,为进一步阐明miR-1904的生物学功能奠定了基础。

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