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摘要本研究以miR-18a-5p和miR-802为研究对象，检测过表达miR-18a-5p和miR-802模拟物对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡的影响作用，预测miR-18a-5p和miR-802可能调控的靶基因。通过双荧光素酶实验， qRT-PCR等方法验证miR-18a-5p和miR-802及其靶基因之间的相互作用关系；构建过表达microRNA的瞬时真核表达载体，分析过表达miR-18a-5p和miR-802及其调控靶基因参与的信号通路的影响，讨论miR-18a-5p和miR-802对结肠癌发生发展的分子机制。<br>　　1.本研究中利用Lipofectamin?3000转染试剂经脂质体瞬时转染技术将过表达miR-18a-5p和miR-802模拟物转染到SW480细胞，检测转染后在不同时间24h、48h、72h内的转染效率；实时荧光定量qRT-PCR结果显示：成功建立瞬时过表达miR-18a-5p和miR-802的结肠癌SW480细胞模型；在48h达到高峰,过表达miR-18a-5p和miR-802模拟物转染到结肠癌SW480细胞中的相对表达量分别为57.38± 8.38，24.62 ±4.22；利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测过表达miR-18a-5p-eGFP组、NC-eGFP组、空白对照组转染结肠癌SW480细胞在不同浓度模拟物（质粒DNA）50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL和200μg/mL在不同时间12h、24h、48h及72h内对结肠癌SW480细胞生长所产生的增殖抑制作用， MTT检测结果显示质粒DNA浓度为200μg/mL时抑制作用比较好，过表达miR-18a-5p模拟物显著抑制结肠癌SW480细胞的增殖，增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。质粒DNA浓度为200μg/mL转染时间12h、24h、48h及72h内的增殖抑制率分别为26.80%、46.37%、66.02%及74.66%；不同浓度在不同时间12h、24h、48h和72h内有显著性差异（P<0.05）。<br>　　2.通过 Annexin V-PE/7-AAD 双染色法,用流式细胞仪检测过表达miR-18a-5p-eGFP组、阴性对照NC-eGFP组在不同时间24h、48h、72h内转染结肠癌细胞后的凋亡率。结果表明，过表达miR-18a-5p模拟物（miR-18a-5p-eGFP）转染到结肠癌 SW480 细胞诱导凋亡时间依赖性。最后应用实时荧光定量qRT-PCR方法，以β-actin作为内参对照转染后的SW480细胞总RNA，qRT-PCR法检测mRNA为模板检测出DUSP5、FZD3及CCND2基因mRNA转录水平的变化。结果显示：DUSP5和FZD3基因的mRNA转录水平上调表达，差异表达倍数分别为2.15、1.74（2-△△Ct比较P<0.01),而且CCND2基因的mRNA转录水平下调表达，差异表达倍数为0.62（2-△△Ct比较P<0.01) ，实验结果提示，过表达miR-18a-5p对SW480细胞具有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,机制可能过表达miR-18a-5p通过MAPK、Wnt和PI3K-AKT信号通路靶向调控DUSP5、FZD3基因的上调表达及CCND2基因的下调表达有关。<br>　　3.miR-802 调控的靶基因 HSPA6、TCF7L2 及 NKD1 mRNA 转录水平；qRT-PCR实验结果显示：NKD1、HSPA6靶基因的mRNA转录水平上调表达，差异表达倍数分别为4.22、3.17（2-△△Ct比较P<0.01),而且TCF7L2基因的mRNA转录水平下调表达，差异表达倍数为0.25（2-△△Ct比较P<0.01);本实验数据与靶基因芯片结果一致，各基因mRNA表达的改变趋势符合前期芯片结果，进一步验证芯片结果的精准程度。<br>　　miR-18a-5p 和 miR-802 在人结肠癌发生发展中起抑癌作用，因此miR-18a-5p、miR-802是治疗人结肠癌的重要分子靶点。