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摘要蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物，具有解毒、止痛、开窍醒神之功效[1]。目前商品蟾酥质量问题突出，混伪、掺假现象普遍存在。亟需构建科学完善的质量控制方法，以提升蟾酥药材、饮片及其中成药制剂的质量控制水平，保障临床用药安全有效。基于此，本论文在前期研究的基础上，建立了蟾酥HPLC特征图谱和一测多评的含量测定方法，比较了主流的不同基原蟾酥的化学差异性，起草了蟾酥药材标准修订草案。从传统经验鉴别出发，系统总结了蟾酥的品质评价概况，制订了蟾酥规格等级标准草案。针对蟾酥普遍存在的掺假使假现象，首次建立了蟾酥中蟾蜍甾的NIR快速检测方法。主要结果如下：<br>　　对市售及采集样品进行薄层色谱分析，发现现版《中国药典》薄层鉴别方法一定程度上可以区分正品蟾酥和假蟾酥。通过不同批次市售蟾酥样品的分析，建立了以五羟色胺、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基为特征峰的对照特征图谱，方法学验证结果表明该方法具有良好的精密度、稳定性和重复性。建立了以华蟾酥毒基为内参物，同步测定蟾酥药材中5种蟾毒配基含量的一测多评法，并对相对校正因子（RCF）的耐用性和系统适用性进行了系统研究。华蟾酥毒基对日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵和脂蟾毒配基的相对校正因子分别为1.05、0.895、1.09和0.913。<br>　　采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法（UPLC-QTOF/MS）对主流不同基原蟾酥进行比较研究。全面总结了蟾蜍中242个蟾蜍甾与生物碱类成分，作为蟾蜍化合物成分数据库，使用Markerlynx软件对不同基原蟾酥的色谱峰进行比对分析。共鉴别了132个化合物，不同基原蟾酥化学成分存在显著差异。华西蟾蜍以沙蟾毒精、华蟾酥毒基为主，花背蟾蜍以日蟾毒它灵、脂蟾毒配基为主。法定品种中华大蟾蜍以蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基为主，黑眶蟾蜍总体上各成分含量均较低，以19-羟基蟾毒灵、蟾毒它灵、脂蟾毒配基为主。<br>　　采用考马斯亮蓝法（Bradford）测定不同来源蟾酥样品的蛋白质含量，结果表明含量在 4.41-28.1%之间。对典型样品进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），所得蛋白条带清晰，蛋白分子量主要集中在40~55 kDa；蛋白样品进行胰酶消化后进行钠升液相-质谱分析，通过与蛋白数据库比对，从中华大蟾蜍中鉴定了408个蛋白，从华西蟾蜍中鉴定了433个蛋白。<br>　　通过查阅古籍，总结了蟾酥历史产区的变迁和品质评价情况，参照现代文献对蟾酥药材的质量评价和市场调查情况，制订了蟾酥药材商品规格等级标准，将其分为团酥和片酥两个规格，各规格下不分级。<br>　　首次建立近红外光谱法快速测定蟾酥药材中5种蟾毒配基类成分的含量测定方法。采用近红外漫反射采集样品光谱，经二阶导数预处理后，最佳建模波段范围为7502.1-5446.3，4601.6-4246.7 cm-1；最佳因子数为5；采用偏最小二乘法将5种蟾毒配基含量之和与近红外光谱进行关联，建立定量分析模型，校正集内部交叉验证R2为0.970，RMSECV为0.922；验证集外部验证R2为0.961，RMSEP为1.68。本研究建立的近红外定量方法能够实现对蟾酥药材的快速分析。