摘要【目的】<br> 1.探讨IL-36β对小鼠脾单个核细胞JAK/STAT和PI3K/Akt通路的影响。<br> 2.探讨IL-36β是否通过JAK/STAT和PI3K/Akt通路上调SLE相关炎症因子(IL-6、IL-17A、IL-21、IL-23、IP-10、MCP-1)表达。<br> 【方法】<br> 1.制备C57BL/6雌性小鼠脾单个核细胞悬液。<br> 2.1~10 ng/ml IL-36β刺激小鼠脾单个核细胞5~60 min,Western blot检测JAK3、STAT2、PI3K、Akt、p-JAK1-3、p-TYK2、p-STAT1-6、p-PI3K、p-Akt变化。3.JAK3抑制剂、PI3K抑制剂预处理后,10 ng/ml IL-36β刺激小鼠脾单个核细胞,30 min后用Western blot检测STAT2、Akt、p-STAT2、p-Akt变化;24 h后用qRT-PCR检测SLE相关炎症因子(IL-6、IL-17A、IL-21、IL-23、IP-10、MCP-1) mRNA水平,Western blot检测IL-17A蛋白变化。<br> 【结果】<br> 1. IL-36β对单个核细胞JAK/STAT和PI3K/Akt通路分子表达的影响<br> 10 ng/ml IL-36β刺激单个核细胞后,p-JAK3、p-STAT2、p-PI3K、p-Akt表达在15 min开始升高,30 min达到高峰,45 min开始下降,60 min回到基线水平;p-JAK2、p-TYK2、p-STAT1、p-STAT3-6 表达在各个时间点无明显变化,而p-JAK1未见表达。<br> 1~10 ng/ml IL-36β均可增加p-JAK3、p-STAT2、p-PI3K、p-Akt表达,其中10 ng/ml IL-36β最为明显。<br> 2. JAK3 抑制剂、PI3K 抑制剂对 IL-36β 诱导单个核细胞 JAK3/STAT2 和PI3K/Akt通路的影响<br> JAK3抑制剂VX-509、PI3K抑制剂 LY294002分别明显抑制IL-36β诱导p-STAT2、p-Akt表达。<br> 3. IL-36β对单个核细胞JAK3/STAT2和PI3K/Akt通路中SLE相关炎症因子的作用<br> qRT-PCR结果显示IL-36β明显上调IL-17A、IP-10、MCP-1mRNA表达(P<0.01),而IL-6、IL-21、IL-23 mRNA水平无明显变化(P>0.05);VX-509、LY294002预处理明显减少IL-36β诱导的IL-17A mRNA水平(P<0.01),而LY294002预处理明显减少IL-36β诱导的MCP-1 mRNA水平(P<0.05)。Western blot结果显示VX-509、LY294002预处理明显减少IL-36β诱导的IL-17A蛋白水平。<br> 【结论】<br> 1. IL-36β以浓度和时间依赖方式激活小鼠脾单个核细胞JAK3/STAT2、PI3K/Akt通路。<br> 2. IL-36β 可通过激活 JAK3/STAT2 和 PI3K/Akt 通路上调小鼠脾单个核细胞IL-17A表达。<br> 3. IL-36β可通过激活PI3K/Akt通路上调小鼠脾单个核细胞 MCP-1表达。
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