检索历史 清除

摘要【目的】<br>　　本研究采用RN181干扰慢病毒分别构建高表达RN181和干扰下调RN181 ,并转染到肝癌细胞系SK-Hep1（人肝癌细胞），行Western Blot鉴定各自表达量。通过CCK8实验、细胞划痕实验检测、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验检测重组不同表达RN181对肝癌细胞生长及转移能力的影响，探讨RN181体外抗肝细胞癌作用，为RN181在肝细胞癌的治疗提供相关实验基础及理论依据。<br>　　【方法】<br>　　1. 利用RN181干扰慢病毒，分别构建高表达RN181和干扰下调RN181,并转染到肝癌细胞系SK-Hep1,并用Western blot检测重组RN181的稳定肝癌细胞系的表达量。<br>　　2. 采用CCK8增殖法检测重组稳定不同表达的RN181肝癌细胞株及其对照组细胞的增殖情况，并绘制各自生长趋势线图。<br>　　3. 采用细胞划痕实验观察重组稳定不同表达的RN181肝癌细胞株及其对照组细胞的迁移能力。<br>　　4. 利用Transwell迁移实验进一步检测重组稳定不同表达的RN181肝癌细胞株及其对照组细胞在体外的迁移能力。<br>　　5. 采用Transwell侵袭实验探索重组稳定不同表达的RN181肝癌细胞株及其对照组细胞株在体外的侵袭能力。<br>　　【结果】<br>　　1. Western blot检测重组肝癌细胞RN181的表达量，结果显示高表达RN181的肝癌细胞系条带较宽，对照组次之，而低表达RN181的肝癌细胞系的条带最窄（P<0.05），如图3.1所示，差异具有统计意义；提示成功构建不同稳定表达的RN181的肝癌细胞株。<br>　　2. 采用CCK8法检测稳定重组RN181和相应对照细胞的增殖情况，结果显示高表达RN181在体外肝癌细胞增殖的生长速度低于低表达组（P<0.05），如图3.2所示，结果有统计学意义。<br>　　3. 细胞划痕实验结果表明，重组高表达RN181组在相同时间内爬过划痕的距离远远小于低表达组及对照组细胞株（P<0.05），而低表达组的肝癌细胞株在相同时间内爬过划痕的距离大于对照组细胞株（P<0.05）,如图3.3所示，提示：重组高表达RN181在体外能明显抑制肝癌细胞的迁移。<br>　　4. Transwell迁移实验结果表明，重组高表达RN181的肝癌细胞株在相同时间内穿过transwell膜的细胞数量明显少于对照组（P<0.05），然而，低表达RN181组却相反，如图3.4所示，提示：重组高表达RN181在体外也能明显抑制肝癌细胞的迁移。<br>　　5. 应用Transwell侵袭实验表明，在存在基质胶的情况下，重组高表达RN181肝癌细胞株在相同时间内穿过transwell膜的细胞数量明显少于对照组细胞株（P<0.05），低表达RN181组则相反，如图3.5所示，提示：稳定高表达RN181能在体外明显抑制肝癌细胞的侵袭。<br>　　【结论】<br>　　重组高表达的RN181在体外抑制肝癌细胞的增殖能力，同时也抑制肝癌细胞在体外的转移和侵袭能力，很可能是通过E3泛素蛋白连接酶的活化从而抑制肿瘤细胞的生长，并诱导其凋亡。