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摘要[目的]：<br>　　本研究拟通过检测去甲斑蝥素(norcantharidine, NCTD)对人骨肉瘤MG63细胞的增殖、凋亡及转移的作用，并探讨去甲斑蝥素对人类骨肉瘤MG63细胞作用可能的机制，为去甲斑蝥素抗骨肉瘤的临床应用提供理论依据。<br>　　[方法]：<br>　　1. 不同浓度NCTD处理人骨肉瘤MG63细胞。<br>　　2. 倒置显微镜下观察不同浓度NCTD处理36h后MG63细胞形态学的影响。<br>　　3. CCK-8法检测NCTD 对MG63细胞增殖活力的影响。<br>　　4. 细胞集落形成实验检测去甲斑蝥素对骨肉瘤MG63细胞增殖和形成细胞集落能力的影响。<br>　　5. PI单染色法流式细胞术检测NCTD 对MG63细胞周期的影响。<br>　　6. AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测NCTD对MG63细胞凋亡的影响。<br>　　7. Hoechst 33342核染色法荧光显微镜下观察NCTD 对MG63细胞核形态学的影响。<br>　　8. 细胞划痕实验检测不同浓度NCTD对MG63细胞划痕愈合能力及细胞迁移能力的影响。<br>　　9. Transwell体系检测不同浓度NCTD处理后MG63细胞的迁移能力。<br>　　10. Western Blotting实验检测与MG63细胞凋亡密切相关的蛋白PARP、P38/p-P38及Bax，与细胞增殖密切相关的MAPKs 信号通路相关蛋白ERK/p-ERK，PCNA及与肿瘤细胞转移密切相关的MMP-9蛋白的表达情况。<br>　　[结果]：<br>　　不同浓度NCTD处理骨肉瘤MG63后，各种体外实验结果如下：<br>　　1. 倒置相差显微镜下观察见MG63细胞脱壁，细胞数量稀疏，细胞体积缩小，&nbsp;细胞边缘皱缩，细胞核碎裂、染色质浓缩、折光性变强，细胞增殖减慢。<br>　　2. CCK-8细胞增殖实验结果提示MG63细胞增殖呈抑制作用，其抑制率呈时间—浓度依赖关系，且低浓度去甲斑蝥素长时间作用MG63细胞的抗增殖能力较为平和，但作用效果缓慢持久。<br>　　3. 细胞集落形成实验可见实验组细胞集落分布较对照组明显稀疏，结晶紫染色也较对照组明显变浅，提示低浓度的去甲斑蝥素作用于MG63细胞后，能明显减弱MG63细胞增殖和形成细胞集落的能力。<br>　　4. PI单染色法流式细胞术提示MG63细胞被去甲斑蝥素阻滞在G2/M期。<br>　　5. AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术实验结果提示不同浓度NCTD可导致MG63细胞凋亡，且呈现浓度依赖性。<br>　　6. Hoechst 33342实验结果提示不同浓度NCTD可以使MG63细胞的细胞核膜不完整、染色质浓染、核碎裂，进而出现细胞凋亡，且细胞凋亡呈现浓度依赖性。<br>　　7. 细胞划痕实验提示NCTD能够明显使得MG63细胞的细胞迁移能力减弱。<br>　　8. Transwell体系实验结果提示不同浓度NCTD处理MG63细胞后细胞迁移能力明显减弱，且呈现浓度依赖性。<br>　　9. Western Blotting实验结果显示，Bax蛋白、PARP剪切带、p-P38表达量随去甲斑蝥素的浓度增大而上升；p-ERK、PCNA蛋白及与肿瘤细胞转移密切相关的MMP-9蛋白随去甲斑蝥素浓度增大表达量下降。<br>　　[结论]：<br>　　体外细胞学实验证明，去甲斑蝥素通过MAPK信号通路抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖、转移并诱导其凋亡。