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摘要目的：<br>　　1．探索成纤维生长因子2（FGF2）腹腔注射是否能改善脓毒症小鼠全身炎症情况。<br>　　2．探究腹腔注射 FGF2 能否改善脓毒症小鼠肺组织病理表现、炎症以及高渗透状态情况。<br>　　3．体外细胞实验，通过脂多糖（LPS）作用于人肺微血管内皮细胞（HPMECs）构建炎症模型，研究FGF2是否能够抑制LPS作用于HPMECs引起的炎症及渗透性升高，并探索其可能参与的调节通路和机制。<br>　　方法：<br>　　一、动物实验<br>　　1. 将10-12周雄性C57BL/6小鼠随机分成三组，每组7—10只：假手术组（sham组）、脓毒症模型组(CLP组)、FGF2治疗组（CLP+FGF2组）。其中，sham组小鼠只行开关腹手术；CLP组小鼠实行盲肠结扎穿孔手术，并予1ml生理盐水促进复苏；FGF2治疗组则在CLP模型基础上，造模6小时再进行FGF2腹腔注射，注射量为0.1mg/kg，而CLP组则给予等量PBS腹腔注射。<br>　　2. 小鼠造模24小时麻醉后，摘除眼球取血，静置离心取血清，各样品用于酶联免疫吸附试验（ELISA）检测相关指标，同时做蛋白芯片检测炎症、血管生成相关指标；肺组织部分用于组织切片，部分应用免疫印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测肺组织炎症、血管通透性以及肺损伤相关指标的蛋白水平和基因表达情况等。<br>　　二、细胞实验<br>　　1. 将人肺微血管内皮细胞（HPMECs）分为三组：空白组（HPMECs+PBS组）、LPS模型组（HPMECs +LPS组）、FGF2治疗组(HPMECs+LPS+FGF2组)。LPS刺激组给予1μg/ml的LPS；FGF2治疗组在给予1μg/ml的LPS的基础上放入终浓度为50ng/ml的FGF2；空白组仅给予等量的PBS。<br>　　2. 作用6小时后，观察HPMECs通透性情况；提取HPMECs蛋白质、RNA分别应用于蛋白免疫印迹技术、实时荧光定量PCR技术观察其相关炎症及细胞通透性相关指标的变化。<br>　　结果：<br>　　1. 酶联免疫吸附试验中较于sham组，CLP组小鼠血清中TNF-α、IL-6等指标明显升高（P＜0.05），而在FGF2治疗后血清中的上述指标均有所下降且均具有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　2. 血管生成相关蛋白芯片结果表明，与sham组相比，CLP组小鼠血清中趋化因子 CXCL1、CXCL10、CXCL16、MCP-1、抑炎因子 IL-10、表皮生长因子（EGF）、基质金属蛋白酶MMP-8等多种细胞因子表达量明显升高， FGF2治疗组中上述指标下降；而成纤维生长因子FGF2表达有所下降， FGF2治疗组中相对升高。<br>　　3. 相较于sham组，CLP组小鼠肺脏蛋白免疫印迹结果可见IL-6、TNF-α、IL-1β、COX2等炎症相关指标表达均明显增加，而FGF2治疗后IL-6、TNF-α、IL-1β、COX2蛋白水平有所下降。<br>　　4. 各组小鼠肺组织中，CLP 组炎症指标 IL-6、VEGF-R、基质金属蛋白酶MMP-8等指标在mRNA水平表达较sham都有明显升高，且有显著统计学差异（P＜0.05），而COX2、EGF在mRNA水平表则无明显升高，FGF2治疗组中IL-6、VEGF-R有明显降低（P＜0.05），而MMP-8无明显改善。<br>　　5. 肺组织病理切片用于做免疫荧光，检测巨噬细胞标志性蛋白 F4/80 在肺组织中的表达，其中CLP造模组的阳性点明显多于sham组，FGF2治疗后则阳性点显著减少。<br>　　6. 造模后，比较各组肺组织的干湿比重，发现CLP组的比重高于对照组，并且有统计学差异（P＜0.05），FGF2 治疗组则有所下降；检测进入肺组织的治疗组则有所下降（P＜0.05）；检测进入肺组织的伊文思蓝含量，测定肺组织通透性，CLP 组肺组织萃取的伊文思蓝溶液所读取的OD 值明显高于 sham 组,FGF2 组有明显的改善，均有统计学差异（P＜0.05）。<br>　　7. 造模24小时后，取小鼠肺灌洗液，检测肺灌洗液细胞数及上清中的蛋白浓度。对比于sham组，CLP组中肺灌洗液的总细胞和蛋白浓度均明显升高（P＜0.05），FGF2 治疗组治疗后有明显降低，并具有统计学差异（P＜0.05）。<br>　　8. 细胞实验中，刺激3.5小时后，LPS刺激组较空白组成环数多，细胞明显聚集，FGF2治疗组则明显缓解成环情况。<br>　　9. 较于PBS组，LPS组刺激6小时后提取炎症相关指标IL-1β、IL-6、IL-10、VEGF-C、TNF-α、COX2，趋化因子IL-8、CXCL16、CXCL10、CX3CL1、MCP-1以及粘附分子VCAM-1的mRNA水平明显升高，且具有统计学差异（P＜0.05），FGF2 治疗后 IL-1β、IL-6、IL-10、VEGF-C、CXCL16、CXCL10、MCP-1均有所下降且有统计学差异（P＜0.05），TNF-α、COX2、IL-8、CX3CL1、VCAM-1无明显下降，而各组间TLR4、CXCL1无明显改变。<br>　　10. 与空白组比较，蛋白免疫印迹可见LPS刺激组炎症因子IL-1β、IL-6以及通道蛋白p-p38、p-AKT表达明显升高，FGF2治疗组有所缓解，而p38、AKT、ERK、p-ERK各组间无明显变化。<br>　　11. 细胞培养于transwell-24孔板中，刺激后检测下室HRP浓度反应细胞通透性，结果可见LPS刺激组HRP含量明显高于对照组（P＜0.05）， FGF2干预组有所减少，且具有统计学差异（P＜0.05）。由于VE-cadherin、α-E-catenin 蛋白与细胞链接相关，检测其蛋白免疫印迹表达结果各组间未见明显改变。检测细胞荧光表达情况可见，较空白对照，LPS组两种细胞链接蛋白明显受损，细胞链接断裂严重，FGF2 治疗后明显改善，另可见LPS组细胞质中有双染点状物增多，FGF2组不明显。<br>　　结论：<br>　　1. 成纤维生长因子2腹腔注射能够明显改善脓毒症小鼠炎症反应，进而缓解相关脏器的炎症及高渗性，从而改善脓毒症小鼠的预后情况；<br>　　2. 成纤维生长因子2能够通过调节炎症及通透性相关指标改善脂多糖刺激下微血管内皮细胞的功能。