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摘要1.研究临床分离肠球菌对磷霉素的耐药性、耐药机制。<br>　　2.分析磷霉素耐药肠球菌的流行特征。<br>　　3.探讨磷霉素耐药肠球菌的联合治疗方案，为临床上磷霉素耐药肠球菌的防控和治疗提供理论依据。<br>　　1.采用琼脂稀释法检测温州医科大学附属第一医院2013年~2016年临床分离肠球菌对磷霉素的耐药性，筛选出磷霉素耐药菌株。<br>　　2.随机选取同期临床分离的20株磷霉素敏感菌株作为对照，通过PCR检测菌株fosA、fosB、fosC、fosX耐药基因的携带情况；以磷霉素非耐药标准菌株ATCC29212作为对照，检测磷霉素靶酶MurA是否存在氨基酸突变。<br>　　3.通过反向PCR检测fosB基因的周围环境。<br>　　4.以RT-PCR方法比较磷霉素耐药菌株与敏感菌株中fosX基因的表达差异。<br>　　5.采用PFGE和MLST分析耐药菌株的同源性及分子流行特性。<br>　　6.采用氨苄西林+庆大霉素、氨苄西林+头孢哌酮两种药物组合进行ST78型磷霉素耐药肠球菌（对磷霉素表现为不同的耐药程度）的时间杀菌试验，初步探讨两种药物联合使用对耐药菌株的体外抗菌活性。<br>　　1.临床分离肠球菌对磷霉素具有较好的敏感性，总耐药率仅为2.6%（20/761），屎肠球菌的耐药率高于粪肠球菌，分别为4.9%和0.3%；磷霉素耐药肠球菌对临床常用抗菌药物具有较高的耐药性，仅对达福普丁、利奈唑胺敏感性较好；磷霉素耐药肠球菌主要来源于尿液标本，科室分布广泛。<br>　　2.20株磷霉素耐药肠球菌均携带fosX基因，其中有5株fosB基因阳性，未检出fosA、fosC基因。20株同期分离的敏感株中也均检出fosX基因，未检测到其他fos耐药基因。与磷霉素非耐药标准菌株ATCC29212的MurA序列比对，发现有10株耐药肠球菌存在磷霉素靶酶MurA突变，其中SC263、SC272、SC779、SC811、SC941、SC980菌株发生了MurA的Cys263Arg、Ser281Gly双突变，SC731、SC965发生Ser281Gly单突变，SC737存在Cys263Arg单突变，SC755则存在MurA的多个氨基酸替代。<br>　　3.反向PCR表明fosB基因与tnpA转座子位于同一个环形DNA上。<br>　　4.fosB基因阴性、MurA未发生突变的6株耐药菌株其fosX基因表达量均高于标准菌株ATCC29212，但表达量水平与磷霉素MIC值不成明显的正相关。<br>　　5.磷霉素耐药肠球菌的ST型分布以ST78型为主，占13株，ST1094、ST267、ST789、ST555、ST585、ST187各1株，还有1株为新的未分型ST型。PFGE表明部分耐药菌株具有较高的同源性，临床上存在耐药菌株的克隆传播和不同亚型耐药菌株的散在流行。<br>　　6.时间杀菌曲线显示：氨苄西林+庆大霉素、氨苄西林+头孢哌酮两种药物组合对2株ST78型磷霉素耐药肠球菌均具有协同作用。其中氨苄西林+头孢哌酮药物组合的联合抑制作用更加明显。<br>　　1.磷霉素对肠球菌具有良好的抗菌活性，4年总耐药率仅为2.6%，屎肠球菌的耐药率高于粪肠球菌；磷霉素耐药肠球菌多呈多重耐药表型。<br>　　2.携带fosB基因、靶酶MurA发生氨基酸替换以及fosX基因表达量升高是肠球菌对磷霉素耐药的主要机制。<br>　　3.临床上存在ST78型磷霉素耐药肠球菌的克隆传播及其他克隆型菌株的散在流行。<br>　　4.氨苄西林+庆大霉素、氨苄西林+头孢哌酮这两种药物组合对磷霉素耐药肠球菌具有协同杀菌作用，其中后者的联合抑制作用更加明显，可为临床上耐药菌株的治疗提供参考依据。