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摘要背景：<br>　　研究PEG-IFNα-2a治疗的慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）不同应答组之间PBMC中microRNAs（miRNAs）的基线表达谱差异及差异miRNAs对乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）清除的预测能力。<br>　　方法：<br>　　制定研究对象入组及排除标准，前瞻性建立PEG-IFNα-2a治疗CHB的研究队列，随访观察研究对象的HBsAg应答情况。入组的研究对象需满足乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）阴性，HBsAg ＜1500 IU/mL等条件。留取入组对象用药前及各治疗时间点的外周静脉血，分离外周血单个核细胞（peripheral blood monoclear cell，PBMC），在液氮中储存备用。根据HBsAg是否清除（HBsAg＜0.05 IU/mL）将研究对象分为应答组和非应答组。本研究共分为两个队列：筛选队列（identification cohort）和验证队列（confirmation cohort）。其中筛选队列采用配对病例-对照研究，将整个研究队列中最先获得应答的10例患者作为病例组，同时按照1∶1的比例配对选择10例非应答患者作为对照组，两组之间配对的参数包括基线HBsAg水平、ALT水平、HBV DNA病毒载量、既往用药史及联合用药情况等；验证队列由整个队列中可用于数据分析的剩余研究对象组成（n=47）。首先利用高通量芯片检测技术检测筛选队列（n=20）中PEG-IFNα-2a不同应答组之间PBMC中miRNAs的基线表达谱，然后根据差异倍数（fold change）＞3、P＜0.05的原则及相关的文献报道选择12条差异miRNAs，其中8条在应答组上调，分别为 hsa-miR-1267、hsa-miR-196-3p、hsa-miR-4774-5p、hsa-miR-3910、hsa-let-7c-3p、hsa-miR-548ah-5p、hsa-miR-4252 和 hsa-miR-5583-5p；另 4 条在应答组下调，分别为hsa-miR-3960、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-335-5p和hsa-miR-23a-3p。在验证队列（n=47）中运用定量逆转录PCR（quantitative reverse-transcription polymerase chainreaction， qRT-PCR）的方法验证差异 miRNAs 表达水平，并运用单因素、多因素 logistic 回归分析、ROC曲线、gene ontology（GO）/Pathway分析等方法分析差异miRNAs对HBsAg清除的预测能力及其可能参与的生物过程。<br>　　结果：<br>　　1. 本研究队列目前共入组97人，至本文总结时（2017年12月1日）有67人完成治疗可用于数据分析，本研究队列 HBsAg 清除率为 40.3%（27/67），其中筛选队列有10例应答者，验证队列有17例应答者。<br>　　2.在27例应答患者中有77.8%（21/27）产生HBsAb（＞10 mIU/mL）。<br>　　3.高通量芯片结果显示，共有417条差异miRNAs（fold change＞1.5，P＜0.05），有342条在应答组上调，75条下调。<br>　　4. qRT-PCR的验证结果显示有4条miRNAs在验证队列的两不同应答组之间差异表达并与芯片结果一致；其余8条中有7条的表达在两组间无统计学差异，剩下的1条虽有统计学差异但与芯片结果矛盾，在HBsAg清除的预测分析中被排除分析。<br>　　5. 单因素logistic回归分析显示miR-3960、miR-126-3p和miR-335-5p均与HBsAg清除相关，而 miR-23a-3p 无统计学差异。MiR-3960、miR-126-3p、miR-335-5p 和miR-23a-3p曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.8333（P=0.001）、0.751（P=0.01）、0.7294（P=0.013）和0.6275（P=0.094），阳性预测值（positive predict value，PPV）分别为84.62%、60.00%、70.00%和28.57%。<br>　　6.多因素logistic回归（step regression，逐步回归）分析显示，miR-3960和miR-126-3p 纳入回归方程时 AUC 和 PPV 分别为 0.8529 和 92.31%，略优于单独的miR-3960，但是没有统计学差异（P=0.567）。<br>　　7. 差异miRNAs的生物信息学分析（GO/Pathway）结果显示，miRNA靶基因富集的信号通路包括：miRNAs与肿瘤相关的信号通路、mTOR信号通路、NOD样受体信号通路和NF-κB信号通路等。<br>　　结论：<br>　　1. PEG-IFNα-2a不同应答组的PBMC中miRNAs基线表达谱存在明显差异。<br>　　2. MiR-3960、miR-126-3p和miR-335-5p与HBsAg清除相关，其中miR-3960在本研究中是最优的HBsAg清除预测标志物，但由于本研究样本量较小，且miRNAs的具体功能还不清除，因此这几条miRNAs是否可用于临床还需扩大样本进行验证。<br>　　3. 基线差异miRNAs可能通过调节与免疫有关的基因表达，影响免疫细胞的分化、激活以及细胞因子产生等生物过程，进而促进病毒和HBsAg的清除。