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摘要背景：<br>　　早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity,ROP）是目前儿童致盲的主要疾病，其患病率随早产儿成活率的增高而不断升高。早产、低体重及吸氧是ROP发生的危险因素，与炎症、氧化应激等因素有关。ROP病理机制非常复杂，目前主要观点认为，高氧导致早产儿尚未发育完全的视网膜血管闭塞，形成视网膜局部组织相对缺氧，刺激促血管生长因子的大量释放和分泌，形成新生血管。氧诱导的视网膜病变（oxygen induced retinopathy,OIR）是研究ROP的主要动物模型。低氧诱导因子（hypoxia-induced factor,HIF）信号通路是缺氧激活的重要信号通路，在缺血缺氧组织中，激活的HIF信号通路上调其下游的促血管生成因子大量释放和分泌，促进新生血管形成。研究证实，利用HIF抑制剂，能有效的控制新生血管的形成和发展。然而，HIF信号通路及HIF抑制剂对OIR形成和发展的影响尚未明确。<br>　　目的：<br>　　本研究探讨HIF信号通路及其下游细胞因子HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）在OIR中的表达情况，并观察HIF抑制剂PX-478干涉HIF及其下游细胞因子对OIR的可能影响，为临床ROP的治疗提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　1．利用75%氧气和少量氮气的混合气体，对出生第7天的C57幼鼠进行吸氧造模至第12天，形成OIR模型鼠，通过视网膜铺片评估造模情况；<br>　　2．利用免疫荧光技术检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF和EPO在OIR视网膜中的形态学表达情况；利用qRT-PCR和Western-Blot技术检测OIR视网膜中HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α、VEGF的mRNA和蛋白质表达水平；<br>　　3．腹腔注射HIF-1α抑制剂PX-478，应用高效液相质谱技术测定视网膜和玻璃体内的药物浓度，绘制药代动力学曲线；应用视网膜铺片染色技术观察腹腔注射HIF-1α抑制剂Hsp90抑制剂或PX-478对OIR无血管区面积和新生血管的影响；应用免疫荧光技术、qRT-PCR和Western Blot技术研究PX-478对HIF-1α及下游细胞因子VEGF和EPO表达的影响；<br>　　4.体外实验中，应用PX-478处理缺氧的猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A），采用Transwell实验、管腔形成实验和免疫荧光染色，检测缺氧诱导的细胞迁移、细胞管腔形成及血管生成相关因子表达，探究PX-478作用于OIR的潜在分子机制；<br>　　5．采用SPSS17.0版医学统计软件进行数据分析，所有数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用Student’s t检验，多个样本的组间比较用单因素方差分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。<br>　　结果：<br>　　1．视网膜铺片显示，OIR小鼠出生后第12天（postnatal day,P12）形成大片无血管区，P17形成新生血管，与ROP病变相似，提示造模成功；<br>　　2.HIF-1α表达在OIR小鼠P12、P17时表达升高，与正常对照组相比有统计学意义，而HIF-2α、HIF-3α在OIR P12及OIR P17时的表达水平与正常对照组相比无统计学差异；HIF-1α下游分子VEGF和EPO在OIR P17时表达水平升高，与正常对照组相比差异有统计学意义；<br>　　3．HIF-1α抑制剂PX-478腹腔注射后，由UHPLC-ESI-M/MS结果可知，PX-478在OIR玻璃体和视网膜均能测到，在6h时达到高峰，24h时降低，48h时几乎测不到；使用PX-478腹腔注射后，OIR小鼠视网膜局部HIF-1α蛋白表达水平明显降低，其下游分子VEGF及EPO的表达水平统一明显降低，与正常对照组相比，差异有统计学意义；<br>　　4．Transwell实验结果显示，在缺氧条件下，细胞迁移明显增加，在缺氧条件下给予PX-478干预时，细胞迁移显著下降；管腔形成实验结果可见，在缺氧条件下，管腔形成增加，管腔长度明显增长；在缺氧条件下给予PX-478干预时，细胞管腔形成明显减少，管腔长度减小，有明显破损；免疫荧光染色结果显示，在缺氧条件下PX-478处理组HIF-1α下游VEGF、EPO、VEGFR2、SDF-1、CXCR4、PDGF-b、TIE2等表达水平降低。以上差异均有统计学意义。<br>　　结论：<br>　　1.HIF信号通路参与OIR形成，其中HIF-1α在OIR造模后表达升高，对OIR的发生发展起着重要的作用；HIF-1α下游重要的促血管生成因子VEGF和EPO表达在OIR造模后也升高，提示HIF-1α可能通过调控VEGF和EPO表达调控OIR。<br>　　2.腹腔注射PX-478抑制OIR小鼠视网膜无血管区和新生血管形成，且对视网膜局部HIF-1α及其下游VEGF和EPO均有良好的抑制作用；PX-478抑制缺氧诱导的细胞迁移和管腔形成，抑制VEGF、EPO、VEGFR2、SDF-1、CXCR4、PDGF-b、TIE2等促血管生成因子的表达，可能是其抑制新生血管形成的分子机制。因而，HIF-1α可做为ROP治疗的潜在靶点。