检索历史 清除

摘要目的：胃癌是严重威胁我国人们健康与生命的常见的恶性肿瘤之一。为阐明其发生发展机制，课题组前期筛选出胃癌组织高表达差异蛋白质RTN4，进一步了解其在胃癌发病过程中的作用与机制，可为揭示胃癌发病的分子机制提供实验资料。<br>　　方法：1、采用PCR方法构建pIRESneo3-RTN4真核表达载体，利用脂质体转染法将pIRESneo3-RTN4真核表达载体，转染永生化胃粘膜上皮GES1细胞，500mg/L G418筛选2周后汇合克隆，扩大培养，建立RTN4高表达GES1细胞系，即GES1-RTN4（GES1-pIRESneo3为载体对照）细胞；<br>　　2、通过细胞免疫荧光和Western-blot检测GES1-RTN4（GES1-pIRESneo3为载体对照）细胞中RTN4的表达；<br>　　3、运用细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪等，观察RTN4高表达对GES1细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响。<br>　　4、采用Western-blot检测GES1-RTN4（GES1-pIRESneo3为载体对照）细胞中IκBα蛋白的表达。<br>　　结果：1、细胞生长曲线结果显示：GES1-RTN4细胞的生长速度较GES1和GES1-pIRESneo3细胞明显加快，说明RTN4高表达后促进GES1细胞的生长与增殖（P＜0.01）；<br>　　2、平皿克隆形成实验结果显示：GES1、GES1-pIRESneo3和GES1-RTN4细胞的克隆数分别为56±8、65±12和128±21（个），GES1-RTN4细胞形成克隆数目较GES1和GES1-pIRESneo3细胞明显增多（P＜0.01），且克隆体积大，说明RTN4高表达后，GES1细胞的克隆形成能力明显增加；<br>　　3、软琼脂集落形成实验结果显示：GES1、GES1-pIRESneo3和GES1-RTN4细胞的集落数分别为64±12、72±16和146±28（个），GES1-RTN4细胞形成的集落较GES1和GES1-pIRESneo3细胞明显增多（P＜0.01），且集落体积大，说明RTN4高表达后GES1细胞的集落形成能力明显增加；<br>　　4、流式细胞仪检测结果显示：GES1细胞S期细胞比为45.63±4.62，G1期细胞比为49.57±8.49，细胞增殖指数为50.43；GES1-pIRESneo3细胞S期细胞比为30.10±6.28，G1期细胞比为48.75±7.86，细胞增殖指数为51.25；GES1-RTN4细胞S期细胞比为55.28±9.15，G1期细胞比为26.88±3.42，细胞的增殖指数为73.13。说明RTN4高表达后GES1细胞中S期细胞比例明显增加，G1细胞比例降低，细胞增殖指数增加（P＜0.01）；同时，GES1、GES1-pIRESneo3和GES1-RTN4细胞的凋亡率降分别为24.65±4.58、24.43±3.36和17.52±1.23，说明RTN4高表达后，细胞的凋亡率降低（P＜0.01）。<br>　　5、Western-blot结果显示：GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白表达较GES1和GES1-pIRESneo3细胞减少（P＜0.01）。<br>　　结论：RTN4通过活化NF-κB信号通路，提高细胞增殖指数，抑制细胞凋亡，促进GES1细胞的增殖。