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类受体激酶基因GSO1和GSO2调控拟南芥芽再生

摘要植物芽再生已被广泛应用于植物快速繁殖以及转基因育种等过程中。关于生长素、细胞分裂素影响植物芽再生的分子机理已有较为深入的研究。类受体激酶(Receptor-like kinase,RLK)在植物的细胞信号转导过程中具有重要的作用,参与植物生长发育的调控。目前,有关类受体激酶基因调控植物再生的研究较少。本研究以模式植物拟南芥为材料,研究LRR型类受体激酶GASSHO1(GSO1)和GASSHO2(GSO2)对于拟南芥芽再生能力的影响,以期揭示其调控植物芽再生的作用机制。主要结果如下:<br>  首先对GSO1和GSO2突变体的芽再生情况进行观察,与野生型Col-0相比,单突变体gso1-1和单突变体gso2-3的芽再生能力没有明显的差异,而双突变体gso1-1gso2-3的芽再生能力受到严重抑制,提示它们在调控芽再生方面具有功能冗余。有趣的是,以Col-0为对照,GSO1和GSO2表达水平升高以后均会导致芽再生能力下降。利用自身启动子驱动GUS报告基因表达的实验结果显示,在芽再生过程中,GSO1在中柱鞘细胞中特异表达,此外,GSO1在愈伤组织和茎端分生组织中均有表达,这与GSO2的表达模式相类似。结果表明,GSO1和GSO2参与调控拟南芥芽再生过程,其表达部位和水平对芽再生具有重要作用。<br>  为了探讨GSOs调控芽再生的机制,以Col-0野生型、gso1-1gso2-3双突变体和过表达GSO2(GSO2-OE)植株的根为外植体诱导芽再生,选取在芽诱导培养基(SIM)上培养16d的愈伤组织进行转录组测序及分析。结果显示,双突变体中表达水平上调的基因有2197个,下调的基因有5979个。通过qRT-PCR对转录组测序数据的可靠性进行了验证。对差异表达基因的GO分析结果显示,gso1-1gso2-3中差异表达基因的分子功能在催化活性和结合活性方面有明显富集。KEGG分析结果显示,双突变体中的差异表达基因在激素信号转导过程、苯丙烷类生物合成过程、光合作用以及核糖体生物功能方面高度的富集。与激素信号转导过程相关的基因共计929个。其中,与生长素信号转导过程相关的基因有296个,与细胞分裂素信号转导过程相关的基因有132个,与脱落酸信号转导过程相关的基因有237个,与乙烯信号转导过程相关的基因有168个,与赤霉素信号转导过程相关的基因有96个。这些结果说明影响激素信号转导相关基因的表达水平与芽再生能力具有密切关系。这为理解GSOs调控芽再生的机制提供了重要信息。对在gso1-1gso2-3和GSO2-OE中表达水平均发生下调的基因进行功能分类,发现下调基因在激素信号响应和转导、水解酶活性、催化活性等过程有高度的富集。上调基因中在次生代谢和酶调节因子活性等方面的通路明显富集。一部分基因在gso1-1gso2-3和GSO2-OE中的表达水平变化方向相反,暗示其表达受到GSOs的直接调控。继而对其中两个差异表达基因IAMT1和WOX11的突变体iamt1-1和wox11-2的芽再生情况进行了分析。发现与野生型Col-0相比,这两个突变体的芽再生能力明显下降。这些结果表明GSOs可能通过多条信号通路来调控芽再生。<br>  本研究的结果表明,GSOs在拟南芥芽再生过程中具有重要的调控作用。其在芽再生过程中的表达模式与其功能相一致。通过转录组测序对受GSOs调控的差异表达基因以及信号通路的分析发现,可能主要通过激素信号转导调控拟南芥的芽再生。这为深入研究GSOs调控拟南芥芽再生的分机理提供了重要信息。

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