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摘要硒是机体必不可少的微量元素，能参与多种酶的生理活动，保护生物膜的结构和功能免受氧化应激损伤。硒缺乏会导致炎症、心脑血管等疾病的发生。食用菌多糖具有抗氧化、增强免疫、预防肿瘤、延缓衰老等多种生物功效，被视为天然药物的重要来源。硒多糖是硒与多糖的有机结合，药理活性较高，易于吸收和利用。<br>　　本课题对真姬菇（Hypsizygus marmoreus）SK-03菌丝体硒多糖（Mycelia selenium polysaccharides，MSPS）和菌丝体多糖（Mycelia polysaccharides，MPS）的结构进行初步分析，检测了MSPS在脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导炎症小鼠模型中的抗氧化和抗炎活性，初探了MSPS发挥器官保护作用的机制，旨在为天然抗炎药物的筛选提供新思路。主要结果如下：<br>　　（1）确定了真姬菇SK-03菌丝体富硒培养基最适Na2SeO3浓度。结果表明，Na2SeO3最适添加浓度为3mg/L，此时真姬菇菌丝体的生物量、富硒率及硒含量分别为2.32±0.05g/L、21.62±1.44%和0.28±0.03mg/g。<br>　　（2）真姬菇MSPS最佳提取参数优化。利用Plackett-Burman（PB）和响应面（Responsesurface methodology，RSM）试验确定了MSPS最佳提取条件为提取时间3h、乙醇浓度85%、乙醇倍数3倍，此条件下多糖得率为3.19±0.35%。经去色素、去蛋白、DEAE-52凝胶纤维素和葡聚糖凝胶柱层析、透析、冷冻干燥等步骤得到纯化后MSPS，其硒含量为68.79±3.46μg/g。<br>　　（3）初步分析了MSPS和MPS结构。气相色谱（Gas chromatography，GC）结果表明，MSPS由鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成，摩尔比为0.009∶1.00∶0.20∶1.27∶2.84∶10.49。MPS由鼠李糖、岩藻糖、核糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成，摩尔比为0.53∶3.93∶0.28∶0.18∶2.23∶12.46∶6.40。通过高效液相色谱（High performance liquidchromatography，HPLC）分析，MSPS平均数均分子量为3.43×103Da，MPS为1.17×103Da。红外光谱（Fouriertransform infrared spectroscopy，FT-IR）分析，MSPS和MPS都存在α和β构型，其中MSPS为吡喃糖，MPS为呋喃糖。原子力显微镜（Atomforce microscope，AFM）扫描结果显示MSPS分散更均一，粒径更细小。<br>　　（4）体外抗氧化活性测定。以羟基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除率及还原力为指标，测定了MSPS和MPS体外抗氧化能力。结果表明，在0~3200mg/L范围内，随着浓度升高，抗氧化能力呈上升趋势，且相同浓度下，MSPS体外抗氧化能力强于MPS。<br>　　（5）MSPS对炎症小鼠抗氧化、抗炎症及器官保护作用分析。通过腹腔注射LPS（5mg/kg）构建炎症小鼠模型，进行MSPS干预处理。结果表明，高剂量MSPS（800mg/kg）试验组小鼠器官保护效果最好，能显著提高小鼠肺、肝和肾中抗氧化酶超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）酶活性和总抗氧化能力（Total antioxidantcapability，T-AOC）；有效抑制各组织中脂质过氧化过程，降低脂质过氧化物（Lipid peroxidation，LPO）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的积累；血清中谷氨酰转肽酶（Glutamyltranspeptidase，GGT）、补体3（Complement3，C3）、超敏C反应蛋白（High-sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）、肌酐（Creatinine，CRE）和尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）水平显著下降，血脂紊乱情况得到改善；血清中抗炎性细胞因子白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）水平显著上升，肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）等促炎性细胞因子水平显著下降。细胞CM-H2DCFDA探针荧光染色，表明MSPS能有效降低肺、肝、肾细胞中活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平，进一步说明MSPS有较强的体内抗氧化能力。细胞凋亡分析发现MSPS（800mg/kg）可改善小鼠的细胞凋亡。上述结果表明MSPS具有抗氧化和抗炎症活性，能起到器官保护作用，组织病理学分析进一步验证了该作用。<br>　　（6）MSPS介导ROS/TLR4/NF-κB信号途径发挥抗氧化、抗炎症及肺脏保护作用的初步分析。腹腔注射LPS（5mg/kg）构建小鼠肺炎模型，高剂量MSPS（800mg/kg）干预后，肺湿干重比（Wet/dry，W/D）和髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）活性显著降低，表明MSPS可减轻炎症反应。免疫印迹法证明MSPS处理后诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达降低，免疫组织化学分析证实MSPS的干预能提高肺组织中抗炎细胞因子IL-10水平。实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR，qRT-PCR）和免疫印迹法对TLR4（Toll like receptor4，Toll样受体4）/NF-κB（Nuclear factor-κB，核转录因子）途径中关键基因和蛋白的表达水平进行了分析，发现MSPS能同时在两种水平上下调TLR4的表达。在上述作用共同影响下，MSPS能降低IKKβ（IκBKinase-β，IκB激酶β）活性，抑制IκB（Inhibitor ofκB，NF-κB抑制蛋白）降解，从而抑制NF-κB的激活，减少下游基因的表达。同时通过免疫组化手段发现NF-κB磷酸化水平降低，证实了NF-κB信号转导途径的激活被抑制。对下游信号分子进行分析，酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）结果表明肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）水平降低，同时MSPS可下调肺组织中IL-1β基因表达及TNF-α蛋白表达量。综上结果表明，MSPS能够通过调控ROS/TLR4/NF-κB信号转导途径发挥抗氧化和抗炎症作用，进而起到器官保护功能。