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摘要哺乳动物大脑皮质经过正常发育最终会形成致密的六层结构，该结构对大脑皮质行使正常的生理功能十分重要。大脑皮质发育异常可能导致：癫痫，认知功能障碍，小脑症和巨脑症等重大神经系统疾病发生的可能。大脑皮质的发育需要经过神经祖细胞增殖，神经元迁移，分化，建立突触联系等多项步骤协调进行。其中，神经元迁移是大脑皮层六层结构形成的基础，新出生的神经元越过原来产生的神经元到达皮质外层，依次形成“由内而外”的层状结构。<br>　　PI3-激酶神经元酪氨酸磷酸化接头蛋白1（neuronal tYrosine-phosphorylated adaptor for PI3-kinase1，Nyap1）是NYAP家族（NYAPs）中的一员，该家族还包括Nyap2和Nyap3。<br>　　NYAPs有一段同源区域具有保守的酪氨酸残基和一段脯氨酸富集区域。NYAPs是大脑中主要的磷蛋白，在与PI3K相关的酪氨酸磷酸化作用中，NYAPs占据其中的四分之三。NYAPs在小鼠大脑皮质中高度表达，并且NYAPs还介导细胞中actin细胞骨架重塑。敲除NYAPs会使神经元突起生长不足，大脑皮质变薄，其中Nyap1的敲除表现得最为明显。Nyap1在整个大脑皮质中都有表达，且从E10开始在围产期前后达到峰值，表明Nyap1在皮质发育中起到重要作用，但对于Nyap1在神经元迁移中的研究还鲜有报道。<br>　　本研究以小鼠大脑皮质为研究对象，通过构建Nyap1的超表达载体（Nyap1），干扰载体（shNyap1），酪氨酸点突变载体（Nyap1Y212F、Nyap1Y257F和Nyap1Y212/257F），运用子宫内电击转染、细胞转染、Western Blot、免疫荧光染色和激光共聚焦拍照等方法，研究分析Nyap1在神经元迁移过程中作用及其机制。此外，通过构建Fyn的干扰载体（shFyn）、酪氨酸激活载体（Fyn-CA）研究Nyap1与Fyn在神经元迁移过程中二者之间的分子机制。主要结果包括：<br>　　1.成功克隆Nyap1基因片段并构建Nyap1的超表达载体，运用细胞转染技术转染3T3细胞，确定超表达载体成功表达；利用子宫内电击转染技术，标记神经细胞，发现Nyap1促进神经元突起伸长和突起分支，通过在不同时间点取材，确定Nyap1促进神经元从中间带（intermediate zone，IZ）向皮质板（cortical plate，CP）的迁移。<br>　　2.成功构建Nyap1的干扰载体，对NIH3T3细胞转染验证，确定质粒成功表达；使用HEK293T细胞转染，Western Blot检测干扰效率；子宫内电击转染shNyap1质粒，观察到神经元迁移受到抑制。主要表现在大部分神经元聚集于IZ（中间带）区，并保持多极形态，多极向双极转换受到抑制。<br>　　3.利用定点突变技术，成功构建Nyap1的酪氨酸点突变载体（Nyap1Y212F、Nyap1Y257F和Nyap1Y212/257F），使用3T3细胞转染质粒，确定质粒成功表达；子宫内电击转染Nyap1Y212F和Nyap1Y257F发现，神经元促进迁移的水平减弱，介于Nyap1和GFP之间；神经元的形态基本恢复正常；转染Nyap1Y212/257F后，神经元迁移受到抑制，在E18.5天，大量神经元仍停留在IZ（中间带）区；CP（皮质板）区神经元形态基本恢复正常，IZ-CP（中间带-皮质板）边界有的神经元出现了两个突起，说明Nyap1酪氨酸磷酸化缺失影响神经元正常迁移和形态。<br>　　4.通过共转shFyn和Nyap1，发现神经元迁移障碍得到挽救；共转Fyn-CA和shNyap1并不能挽救神经元迁移障碍；共转shFyn和Nyap1Y212/257F并不能完全挽救神经元迁移障碍。以上结果说明，Nyap1是Fyn的下游分子之一，Fyn可以通过磷酸化Nyap1发挥作用。<br>　　综上所述，Nyap1的酪氨酸磷酸化作用是调控神经元迁移的关键，并且Fyn可以通过磷酸化Nyap1调控神经元迁移。