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摘要目的：<br>　　侵袭转移是结直肠癌患者突出的病理特征及首要的死亡原因。细胞连接的破坏则是结直肠癌等上皮源恶性肿瘤细胞获得侵袭转移表型的首要因素，其中标志性的分子事件是上皮型-钙粘蛋白（Epithelial cadherin,E-cadherin）的下调。阻止E-cadherin下调，是抑制结直肠癌侵袭转移表型的重要努力方向。深入探讨E-cadherin下调的分子机制，可望更全面地认识结直肠癌的侵袭转移，进而为结直肠癌抗侵袭转移治疗提供新的选择。<br>　　肿瘤细胞中E-cadheirn蛋白水平受到多种因素的调控。既往认为，主要是一些转录前或转录水平调控机制，如编码基因CDH1的突变、表观遗传学调控、转录抑制等，主导了E-cadherin蛋白水平的下降。然而，越来越多的结果显示，对CDH1转录前或转录水平的调控与E-cadherin蛋白水平的改变并不一致，提示可能存在转录前或转录水平以外机制，参与了E-cadherin蛋白水平的下调。因此，从转录前/转录水平以外的机制出发，有助于寻获新的阻止E-cadherin下调的策略。<br>　　溶酶体主要负责通过内化、吞噬和自噬途径降解包括蛋白质在内的各种大分子或细胞器，在蛋白质丰度调节过程中居于核心地位。既往研究表明，通过溶酶体的降解，是肝癌中控调控E-cadherin蛋白水平的另一种重要方式。而结直肠癌中溶酶体对E-cadherin蛋白水平的调控作用，有待探索。明确溶酶体对结直肠癌E-cadherin蛋白水平的调控作用及其对患者预后的影响，是干预结直肠癌转移、延长结直肠癌患者预后的重要前提之一。<br>　　低pH值，是实体肿瘤的生长微环境。前期研究发现，在酸性微环境的刺激下，肿瘤细胞中溶酶体数目增加且大多分布于细胞膜周围。此外，研究结果表明，酸性微环境可介导E-cadherin蛋白水平的降低。然而，酸性微环境下，溶酶体的数量/空间分布与结直肠癌E-cadherin水平及其转移的关系，尚不清楚。从溶酶体-出发，探寻调控E-cadherin降解的机制，可望寻获全新的靶向结直肠癌侵袭转移的防治策略。<br>　　方法：<br>　　1.利用数据集（Colon Adenocarcinoma TCGA-632、GSE41258、GSE40967）分析转移性和非转移性结直肠癌CDH1mRNA水平和甲基化程度。通过组织芯片Hlin-Ade075ME t-01（包含14例原发灶/癌旁/转移灶，14例原发灶/转移灶，4例转移灶）进行E-cadherin免疫组织化学染色，利用IPP定量分析E-cadherin蛋白表达。<br>　　2.在结直肠癌石蜡组织连续切片（n=4，＞5个高倍视野/切片）中进行E-cadherin和溶酶体相关膜蛋白（Lamp2）染色，在结直肠癌冰冻组织（n=8，5个视野/切片）进行免疫荧光溶酶体/E-cadherin双染，分析溶酶体数目与E-cadherin蛋白水平之间的相关性。<br>　　3.在结直肠癌组织芯片（HCol-Ade180Sur-08、HCol-A180Su11-T-067各包含90例癌/癌旁组织）中进行Lamp2染色，分析溶酶体数目/定位与结直肠癌临床病理参数和预后的关系。Cox回归检验溶酶体数目、定位对结直肠癌患者的预后预测作用。<br>　　4.通过KEGG寻找与溶酶体相关的基因，通过String构建溶酶体相关蛋白相互作用网络，分析并筛选相互作用强的基因（基因集A）；同时TCGA数据库（Colon Adenocarcinoma TCGA-632）提取溶酶体相关基因的mRNA表达量，根据mRNA表达量和生存状态绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC），并计算曲线下面积（Area under curve，AUR），筛选AUR大于0.5的基因（基因集B）；将基因集A和B通过韦恩图求交集得到基因集C，通过基于LASSO算法回归模型对基因集C进行回归分析，生成溶酶体多基因分数（LysosomalGene Score，LGS），并分析LGS在结直肠癌中的预后意义。利用GEO（GSE41258）数据集分析转移灶和原发结直肠癌病灶基因集C中LAMP2基因的表达差异；利用TCGA（Colon Adenocarcinoma TCGA-632）和GEO（GSE40967、GSE71187）数据集对LAMP2进行生存分析，COX回归检验LAMP2在结直肠癌预后中的预测意义。<br>　　5.氯喹处理人结直肠癌细胞系HCT116和HT29，分别在0、4、8、12小时SiRNA干预LAMP2表达，Western Blot检测E-cadherin蛋白表达，实时荧光定量PCR（Real time qPCR）检测CDH1mRNA表达水平。<br>　　6.HT29、HCT116细胞系置于酸性培养基（pH=6.5）中培养，获得慢性酸适应细胞，SiRNA-LAMP2敲低LAMP2表达，检测E-cadherin蛋白水平和mRNA水平变化情况。<br>　　结果：<br>　　1.转移性和非转移性结直肠癌中CDH1转录/转录前调控机制不能完全解释E-cadherin蛋白水平的变化。<br>　　2.溶酶体数目、定位与E-cadherin蛋白水平负相关，与结直肠癌临床病理参数和预后相关。<br>　　3.溶酶体膜蛋白Lamp2的高表达与结直肠癌患者的转移和预后不良相关。<br>　　4.下调LAMP2可上调结直肠癌细胞的E-cadherin蛋白水平。<br>　　结论：<br>　　1.结直肠癌组织中溶酶体数目和分布与E-cadherin蛋白水平、患者临床病理参数及预后密切相关。<br>　　2.溶酶体膜相关蛋白Lamp2是结直肠癌患者的独立预测因子。<br>　　3.下调溶酶体相关膜蛋白Lamp2可上调E-cadherin蛋白表达。