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摘要胃癌（gastric cancer, GC）是全球常见恶性肿瘤，严重威胁人类健康。据2017年2月，国家癌症中心发布的中国最新癌症数据显示，胃癌位于我国癌症发病率第四位，死亡率第二位。化疗作为肿瘤的传统治疗手段，存在有效率低、不良反应大以及获得性耐药等问题。分子靶向治疗由于具有较好的分子选择性，可高效杀伤肿瘤细胞，减少对正常组织的损伤，因而成为肿瘤患者的主要治疗方式之一。因此，寻找阳性表达率高的基因靶点并探讨其作用机制已成为当前胃癌分子靶向治疗的迫切需要。<br>　　膜联蛋白（annexin, ANX）是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白家族，该家族多个成员的表达异常与肿瘤细胞的恶性程度、转移侵袭及临床进展密切相关。多项研究表明，该家族成员膜联蛋白A7（ANXA7）表达异常与胃癌的发生、发展密切相关，许多学者已将ANXA7作为分子靶点，从多种角度探索其在肿瘤发生发展与治疗方面的作用。p21是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，作为 KIP 家族的代表，不仅可以抑制 CDK4/6-cyclinD 和CDK2-cyclin E复合体的结合，使细胞G1?S期受阻；还可以通过与PCNA相互作用抑制DNA聚合酶延伸DNA从而抑制细胞增殖。多项研究证实p21的表达失调参与影响了胃癌的发生发展。但对于ANXA7与p21在胃癌中的相关性研究，目前国内外尚未见报道。<br>　　本研究拟通过检测ANXA7和p21在胃癌中的表达，分析二者相关性；而后在体外水平改变ANXA7的表达，检测其对胃癌细胞产生的影响，并探讨其影响胃癌发生发展的机制，以初步阐明 ANXA7 可通过p21-cyclin/CDK-PCNA-E2F信号轴影响胃癌的发生发展，同时为ANXA7成为临床胃癌靶向治疗的潜在靶点提供新的实验依据，具有重要的临床意义。<br>　　目的：<br>　　1 组织水平：通过检测ANXA7与p21在胃癌组织及癌旁正常胃粘膜组织中的表达，探讨ANXA7、p21在胃癌中的表达与胃癌临床病理学特 征的关系及二者的相关性。<br>　　2 细胞水平：通过下调ANXA7在胃癌细胞中的表达，探讨ANXA7低表达对人胃癌细胞增殖的影响及其机制。<br>　　方法：<br>　　1 组织水平：于2016年9月至2018年5月收集承德医学院附属医院及承德市中心医院共50例胃癌石蜡组织标本及20例新鲜胃癌组织标本，每例标本包含胃癌组织和相应癌旁正常胃粘膜组织。采用免疫组织化学SP法检测50例石蜡组织标本中ANXA7和p21的表达；采用Western blot方法检测20例新鲜组织标本中ANXA7和p21的表达。<br>　　2 细胞水平：（1）体外培养人正常胃粘膜 GES-1 细胞、人胃腺癌高分化 MKN-28 细胞、人胃腺癌中分化 SGC-7901 细胞和人胃腺癌低分化MGC-803细胞，采用Western blot法检测ANXA7表达最高的一株细胞。（2）将 ANXA7 表达最高的胃癌细胞分为 si-ANXA7 组、阴性对照组（si-con）和空白对照组（blank），采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA脂质体转染法分别转染胃癌细胞，空白组不予任何处理，转染后48h分别采用qRT-PCR和Western blot法在mRNA水平和蛋白水平进行抑制效率的鉴定。（3）MTT 和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。（4）流式细胞术检测细胞周期分布情况。（5）qRT-PCR和Western blot法在mRNA和蛋白水平检测p21、PCNA 、cyclinD1、cyclin E、E2F1的表达情况。<br>　　结果:<br>　　1 组织水平：（1）免疫组化实验结果显示ANXA7在胃癌组织中的阳性表达显著高于癌旁正常胃粘膜组织，差异具有统计学意义（P<0.05）。p21在胃癌组织中的阳性表达显著低于癌旁正常胃粘膜组织，差异有统计学意义（P<0.05）；ANXA7在胃癌组织中的差异表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关，差异有统计学意义（P<0.05）；p21 在胃癌组织中的差异表达与肿瘤的浸润深度有关，差异有统计学意义（P<0.05）。42例ANXA7阳性表达的胃癌患者中p21阳性表达的有10例（24%），p21阴性表达的有32例（76%）；8例ANXA7阴性表达的胃癌组织中p21阳性表达的有 5 例（63%），p21 阴性表达的有 3 例（37%），经 Spearman相关性分析显示胃癌组织中 ANXA7 和 p21 的表达呈负相关（χ2=4.79，P<0.05，rs=-0.31）。（2）Western Blot 实验结果示，胃癌组织中 ANXA7蛋白的表达显著高于癌旁正常胃粘膜组织，差异有统计学意义（P<0.05）；胃癌组织中p21的表达显著低于癌旁正常胃粘膜组织，差异有统计学意义（P<0.05）。<br>　　2 细胞水平：（1）胃癌细胞中 ANXA7 的表达显著高于正常胃粘膜GES-1细胞中ANXA7的表达，且ANXA7在人胃腺癌低分化MGC-803细胞株中表达最高，差异有统计学意义(P<0.05)。（2）靶向 ANXA7 的siRNA 可显著抑制 ANXA7 的表达，差异有统计学意义(P<0.05)。（3） ANXA7 表达受抑后，与阴性对照组和空白对照组比，si-ANXA7 组细胞增殖显著抑制，差异有统计学意义(P<0.05)。（4）ANXA7 表达受抑后，与阴性对照组和空白对照组比，si-ANXA7组细胞G1期阻滞显著，差异有统计学意义(P<0.05)。（5）ANXA7 表达受抑后，与阴性对照组和空白对照组比，si-ANXA7组PCNA、cyclinD1、cyclinE、E2F1的表达明显下调差异有统计学意义(P<0.05)；p21 的表达显著上调，差异有统计学意义(P<0.05)。<br>　　结论：<br>　　1 ANXA7在胃癌中显著高表达，且其在胃癌中的差异表达与肿瘤的分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关；而p21在胃癌中显著低表达，且其在胃癌中的差异表达与肿瘤的浸润深度相关。<br>　　2 ANXA7与p21在胃癌中的表达具有负相关关系。<br>　　3 ANXA7可通过调控p21-cyclin/CDK-PCNA-E2F信号轴影响细胞周期，进而促进细胞增殖。