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摘要第一部分：糖尿病肾病关键ceRNA网络构建分析及验证<br>　　目的 检测糖尿病肾病小鼠差异表达的mRNA与lncRNA,构建糖尿病肾病关键ceRNA相互作用网络；筛选可能参与糖尿病肾病系膜增生的关键ceRNA对。方法 通过高通量测序技术，获得在糖尿病肾病小鼠肾脏组织中差异表达的mRNA及lncRNA;通过BioMart去除在ENSEMBLE 数据库中未收录的RNA;通过MiRanda及StarBase数据库预测糖尿病肾病lncRNA-miRNA-mRNA相互作用网络;利用hypergeometric test构建糖尿病肾病差异ceRNA网络、KEGG及GO分析差异ceRNA网络;分析中心性参数(Degree和betweenness),构建糖尿病肾病关键ceRNA网络；应用qRT-PCR检测关键ceRNA网络在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高低糖培养系膜细胞中的表达。结果 应用二代测序技术，得到差异表达mRNA及lncRNA，通过hypergeometric test保留了具有显著共享关系的相互作用对，在前15%的degree与betweenness的交集有中3个lncRNA和5个mRNA， mRNA Trim11与lncRNA H2k2在组织细胞表达一致，二者共享的miRNA中miR-449a与miR-449b的表达符合ceRNA原理。结论 糖尿病肾病关键ceRNA相互作用网络中的H2k2/miR-449a/b/Trim11可能参与糖尿病肾病系膜增生。<br>　　第二部分：lncRNA H2k2的差异表达特征及靶向miR-449a/b对糖尿病肾病小鼠肾系膜细胞增殖的影响<br>　　目的 探讨lncRNA H2k2靶向miR-449a或miR-449b对高低糖培养的肾小球系膜细胞的增殖影响。<br>　　方法 运用原位杂交(FISH)技术及核质分离RNA的qRT-PCR，检测H2k2在肾系膜细胞的亚细胞分布；qRT-PCR检测在高低糖培养的系膜细胞中转染小干扰RNA siH2k2.1、siH2k2.2及siH2k2.3或lncRNA H2k2过表达质粒H2k2（+）后沉默或过表达效率；5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测流式细胞术、Western Blot检测在高低糖培养的系膜细胞中转染siH2k2或H2k2（+）及miR-449a/b的mimics或inhibitor后对系膜细胞增殖的影响；双荧光素酶实验验证miR-449a/b与H2k2的靶向作用；qRT-PCR检测上下调H2k2或上下调miR-449a/b后RNA 的表达。结果 lncRNA H2k2在系膜细胞细胞质及细胞核均有分布，以细胞质为主；在低糖培养的系膜细胞中过表达H2k2及抑制miR-449a/b后，H2k2上调200倍，系膜细胞的增殖增加；G0/G1期细胞减少，S期细胞增加，细胞周期阻滞在S期；周期蛋白Cyclin D1表达增加；高糖培养的系膜细胞中沉默H2k2或过表达miR-449a/b后，siH2k2.1、siH2k2.2与siH2k2.3均可以抑制H2k2的表达，其中siH2k2.3抑制效率最好，H2k2表达下降70%；高糖培养的系膜细胞的增殖减少， G0/G1期细胞增加，S期细胞减少，Cyclin D1减少。结论 lncRNA H2k2调节系膜细胞增殖；H2k2与miR-449a/b具有靶向结合关系；miR-449a/b调节系膜细胞增殖。<br>　　第三部分：lncRNA H2k2 通过miR-449a/b及Trim11-Mek/Erk信号途径调控高糖培养的肾小球系膜细胞的增殖研究。<br>　　目的 探讨lncRNA H2k2 靶向miR-449a或miR-449b通过Trim11/Mek/Erk信号途径影响高糖培养的肾小球系膜细胞的增殖研究。方法 生物信息学预测miR-449a/b与Trim11的结合位点；双荧光素酶实验验证miR-449a/b与Trim11的靶向作用；qRT-PCR检测上下调H2k2或上下调miR-449a/b后Trim11的表达；Western Blot检测上下调H2k2或上下调miR-449a/b后Trim11、细胞周期蛋白Cyclin D1、Mek、Eek信号通路表达；EdU检测miR-449a/b的mimics或inhibitor后对系膜细胞增殖的影响，H2k2协同作用对肾小球系膜细胞的增殖能力的影响；流式细胞术检测miR-449a/b对系膜细胞周期的影响；Western blot及EdU检测Mek信号通路抑制剂U0126或抑制trim11后H2k2对系膜细胞增殖的影响。结果 miR-449a/b通过直接靶向Trim11 3′UTR区；在高糖培养的系膜细胞中过表达miR-449a/b及H2k2，系膜细胞的增殖减少，Trim11蛋白表达下降，磷酸化Mek1/2、Eek1/2减少；在低糖培养的系膜细胞沉默miR-449a/b，H2k2升高，细胞的增殖增加，G0/G1期细胞减少，S期细胞增多，Cyclin D1增加，Trim11蛋白表达升高，磷酸化Mek1/2、Eek1/2增加。结论 lncRNA H2k2通过miR-449a/b可抑制系膜细胞增殖，其机制可能与抑制靶基因Trim11影响Mek、Erk的表达有关。