检索历史 清除

摘要背景<br>　　甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤，其发病率在过去10年迅速上升。其中，乳头状甲状腺癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是最常见的甲状腺癌病理类型，其属于一种分化型甲状腺癌。甲状腺癌的发生和发展是一个涉及多种因素、多种基因和多种信号通路的复杂过程。因此，探讨甲状腺癌生物学行为的分子机制，对进一步提高甲状腺癌患者的治愈率与生存率具有重大意义。<br>　　CITED1 (Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1, also known as MSG1)属于转录共激活因子家族。近年来相关研究表明，甲状腺癌、黑色素瘤、Wilms瘤、成肝细胞瘤及其他肿瘤中CITED1表达异常，与肿瘤发生和发展密切相关，表明CITED1可能发挥着类似癌基因的作用。<br>　　目的<br>　　本研究将通过体内外实验明确CITED1对甲状腺乳头状癌生物学行为的影响，并探讨其是否通过Wnt/β-catenin信号通路引起上述一系列过程，为甲状腺乳头状癌的早期诊断及治疗提供新的思路。<br>　　方法<br>　　（1）分别用real-time PCR和western blot方法检测三种甲状腺乳头状癌细胞株K1, BCPAP, TPC-1和正常甲状腺组织细胞Nthy-ori 3–1中的CITED1 mRNA和蛋白表达水平，从中选取CITED1表达水平最高的甲状腺乳头状癌细胞进行下一步实验。<br>　　（2）分别用CITED1-shRNA及其阴性对照NC-shRNA的重组慢病毒感染K1细胞，采用real-time PCR和western blot方法检测 CITED1基因沉默效率；然后采用 CCK-8 法检测细胞增殖，FCM 法检测细胞周期和细胞凋亡，细胞划痕愈合实验和transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力；最后通过western blot方法检测沉默CITED1表达后β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达变化。<br>　　（3）在裸鼠皮下接种K1细胞，建立裸鼠移植瘤模型，观察小鼠肿瘤形成情况。每3d测量裸鼠移植瘤长度及宽度，计算移植瘤体积。于27 d后处死裸鼠并取出完整的移植瘤组织，称取瘤重，并用western blot方法检测移植瘤中β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达水平。<br>　　结果<br>　　（1）CITED1在甲状腺癌细胞中的表达明显高于正常甲状腺组织细胞，但CITED1在K1细胞中的相对表达高于BCPAP, TPC-1细胞，因此将K1细胞用作后续实验所需细胞。<br>　　（2）经携带 CITED1-shRNA 的重组慢病毒感染后，甲状腺乳头状癌 K1细胞中 CITED1 mRNA 和蛋白的表达水平均明显降低，证明成功获得了 CITED1基因沉默的K1细胞株。沉默 CITED1基因表达后，K1 细胞的增殖能力显著降低，细胞凋亡率明显增加，G 0/G 1 期细胞比例明显增高，G 2/M 及 S 期细胞比例降低，划痕实验表明细胞迁移能力明显减弱，而且transwell实验表明细胞迁移和侵袭能力均减低；western blot实验检测到沉默CITED1的表达可以增加β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达。<br>　　（3）裸鼠成瘤实验表明，CITED1-shRNA组裸鼠移植瘤生长速度缓慢，移植瘤体积和重量均明显减小。western blot实验结果和体外实验结果一致，CITED1-shRNA组裸鼠移植瘤β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达水平均增加。<br>　　结论<br>　　（1）CITED1在PTC细胞中的表达相对于正常甲状腺组织细胞更高。<br>　　（2）CITED1可以促进PTC生长、侵袭和迁移，且抑制其凋亡。<br>　　（3）CITED1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来促进PTC的发生发展。