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脂联素通过AMPK通路调节破骨细胞形成和骨吸收功能

摘要目的:<br>  探究脂联素对破骨细胞形成和骨吸收功能的影响及从能量代谢的角度阐明其具体机制。<br>  方法:<br>  1.表象实验<br>  在细胞因子的诱导下,破骨细胞前体细胞BMMs(骨髓来源单核细胞)以及RAW264.7细胞系向破骨细胞形成过程中,比较无毒浓度下不同浓度的脂联素对破骨细胞形成以及骨吸收的影响:a.CCK-8法确定脂联素的安全浓度(包括BMMs和RAW264.7细胞系);b.研究脂联素对BMMs以及RAW264.7细胞系向破骨细胞形成的影响;c.通过对破骨细胞肌动蛋白环和骨溶解后的吸收陷窝形成的研究,明确脂联素对破骨细胞骨吸收功能的影响。<br>  2.机制研究<br>  从脂联素受体,破骨细胞分化通路相关蛋白及能量代谢相关蛋白探究脂联素影响破骨细胞形成的具体机制:a.qPCR确定RAW264.7细胞中脂联素发挥作用所结合的受体类型;b.Western blotting明确脂联素对破骨细胞分化相关蛋白MAPK的影响;c.Western blotting 明确脂联素对能量代谢相关蛋白AMPK的影响;d.Western blotting明确加入AMPK抑制剂Compound C后脂联素对MAPK的作用。<br>  结果:<br>  1.表象实验:<br>  a.脂联素在10 μg/mL对破骨细胞前体细胞产生毒性影响;b.随着脂联素浓度增加,破骨细胞形成逐渐减少;c.随着脂联素浓度增加,破骨细胞的功能减弱,表现为肌动蛋白环和骨片陷窝减少。<br>  2.机制研究:<br>  a.脂联素结合脂联素受体1(AdipoR1)发挥生物学功能;b.RANKL刺激下的p38MAPK的磷酸化可以被脂联素显著抑制;c.AMPK可以被脂联素激活;d.AMPK抑制剂Compound C可取消脂联素对p38AMPK的磷酸化的抑制。<br>  结论:<br>  脂联素在无毒的浓度下可通过结合 AdipoR1 激活 AMPK 从而抑制p38MAPK通路最终抑制破骨细胞形成和骨吸收功能。

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导师 戴闽
学位信息:
南昌大学医学部 临床医学 运动医学(硕士) 2019年
分类号 R58
发布时间 2019-11-20
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