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摘要研究背景：<br>　　下腰痛（low back pain, LBP）因其高发病率、高致残率，以及由此付出的高额医疗花费，日益成为一个严重的公共健康问题。目前普遍认为椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IDD）是其主要的发病机制，而在IDD进程中尤以位于中央的髓核组织改变最为显著。髓核细胞（nucleus pulposus cells, NPCs）凋亡加剧，胞外基质（extracellular matrix, ECM）代谢失衡被认为是IDD的主要特征。减少NPCs凋亡，促进ECM合成代谢是治疗IDD的主要策略。白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor, LIF）是一种多功能细胞因子，作者前期已研究报道LIF对软骨细胞ECM基质代谢有着重要调控作用，而NPCs作为一种“类软骨细胞”，与软骨细胞表型相近，因此我们大胆提出如下科学假设：LIF同样对退变椎间盘NPCs的凋亡和ECM代谢调控扮演着重要角色。<br>　　目的：<br>　　以人退变NPCs和兔IDD模型为研究对象，探讨LIF对退变NPCs凋亡及ECM代谢的影响及其机制研究。<br>　　方法：<br>　　首先通过针刺法构建兔IDD模型，术后特定时间点行磁共振检测影像学评价IDD程度；并在对应时间点处死后摘取髓核组织，组织标本行番红O/固绿染色观察ECM表达情况，提取组织蛋白后western blot检测LIF蛋白表达。分离提取人退变NPCs，加入不同浓度重组人LIF蛋白（rhLIF 0 、10 、20 、 50 、100 ng/ml）后，分别行阿利新蓝染色、CCK-8检测及Annexin V-FITC/PI流式细胞术，初步探讨LIF对退变NPCs凋亡及ECM代谢的影响。<br>　　为进一步探讨LIF调控ECM表达的机制，采用不同浓度rhLIF蛋白刺激不同时间后，western blot检测ECM主要成分II型胶原（COL2）和聚蛋白多糖（AGCAN），同时检测关键ECM代谢酶MMP-3和TIMP-1表达。此外，还检测了Akt和MAPK信号通路，为进一步验证ERK1/2通路对ECM表达的影响，加入其特异性抑制剂PD98059后再行COL2和AGCAN蛋白表达检测。最后采用直接椎间盘穿刺注射的方式分别将rhLIF，或rhLIF+PD98059注入兔IDD动物模型体内，观察其对延缓IDD的实际疗效。<br>　　结果：<br>　　针刺法成功构建兔IDD模型后，检测发现随着时间推移磁共振显示其椎间盘含水量逐渐下降；同时番红O/固绿染色结果显示其ECM加剧降解，western blot结果提示LIF表达随着退变加剧，表达升高。体外细胞学实验提示加入rhLIF后，退变NPCs的ECM合成增多，细胞活力增强，同时减少了细胞凋亡。初步提示LIF对退变NPCs的ECM合成及凋亡具有重要调控作用。进一步行机制探讨发现，rhLIF可以显著上调ECM主要成分COL2和AGCAN表达，同时抑制MMP-3、提高TIMP-1表达，提示对ECM代谢酶有着重要影响。信号通路检测结果表明， rhLIF可以激活ERK1/2通路，而加入PD98059后，western blot结果提示COL2和Aggrecan蛋白表达明显下调。最后兔IDD模型体内实验表明，rhLIF可以切实延缓体内椎间盘退变进程，但加入PD98059后上述治疗效果被大大削弱。<br>　　结论：<br>　　LIF在退变髓核细胞中高表达，可以抑制NPCs凋亡、促进ECM合成，其促进ECM合成与ERK1/2信号通路的激活有关。本研究有望为今后寻找治疗IDD的新靶点提供参考。