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基于万古霉素和原卟啉的高分子抗菌剂对病原菌的鉴定和灭活

摘要细菌感染导致严重的健康问题,危害人类的生命安全,特别是由革兰氏阳性菌引起的感染可引起多种严重疾病,例如败血症、菌血症、肺炎、骨髓炎和心内膜炎等。从1942年发现青霉素至今,先后就有近20类上百种抗菌药物应用于临床,在治疗感染,控制细菌性传染病流行等方面发挥了积极作用。但是,由于细菌敏感性变迁,临床不合理使用抗生素等导致多重耐药菌(MDR)的出现,并且由MDR所引起的细菌感染死亡率逐年上升,使得感染性疾病的治疗与控制面临极大的挑战。此外,快速准确地鉴别病原体类别,对症下药,既可以提高救治重症细菌感染患者的成功率,也可以避免抗生素的滥用从而导致细菌耐药现象的发生,在临床治疗细菌感染方面具有重要的意义。荧光标记检测技术检测灵敏度高、速度快,在细菌鉴定方面具有广阔的应用前景。带有荧光功能的抗菌剂既能够通过荧光技术鉴定细菌,又能够成功灭活它们。因此,设计与合成荧光抗菌剂能够为日益严峻的细菌感染问题提供诊疗手段。<br>  基于上述研究目标,本文合成两种带有荧光功能的抗菌剂,通过抗菌剂携带的官能团与细菌作用进行细菌成像和鉴定,以及灭活。主要研究内容涵盖以下两部分:<br>  1.万古霉素修饰的聚噻吩用于革兰氏阳性菌的鉴定和灭活:水溶性聚噻吩是一种重要的荧光共轭聚合物,而万古霉素能与革兰氏阳性菌细胞壁上的D-丙氨酸-D-丙氨酸(D-Ala-D-Ala)单元相结合,达到靶向作用功效。在这项工作中,作者采用Fe3+催化氧化聚合法制备了一种含活性五氟苯酯(PFP)的活性聚噻吩衍生物。该聚合物与万古霉素以及α-甲氧基-ω-氨基聚(乙二醇)(mPEG-NH2)通过氨基-活性酯反应,制备具有良好水溶性且能发出荧光的万古霉素修饰的聚噻吩(PTPVan)。为了检查结合万古霉素的PTPVan是否能抑制革兰氏阳性菌的生长,本工作首先评价了PTPVan的抗菌性能。因为万古霉素能够选择性识别革兰氏阳性菌,本工作还通过肉眼、荧光光谱法以及共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察了细菌与PTPVan孵育后细菌颜色和荧光变化情况。上述研究结果显示PTPVan对革兰氏阳性菌有抑制生长的作用且能选择性识别革兰氏阳性菌。<br>  2.水热衍生的原卟啉纳米颗粒用于细菌的成像和灭活:原卟啉(PPIX)是一种常见的光敏剂(PS),能够发射出红色荧光,在可见光或近红外光照射情况下能产生活性氧自由基(ROS),所产生的ROS可用于光动力抗菌化学疗法(PACT)。聚乙烯亚胺(PEI)是水溶性高分子,带有正电荷,可以增强光敏剂与细菌的作用。本项工作中,作者采用简单的水热法,利用PEI与PPIX之间的酰胺化作用制备含有丰富氨基和原卟啉基团的原卟啉纳米颗粒(PPIX-PEINPs)。利用X射线光电子能谱、紫外-可见吸收分光光度计、荧光分光光度计、粒度/Zeta电位仪和透射电子显微镜对PPIX-PEINPs的粒径、形貌、表面电位、光学性能和化学结构进行表征。通过最低抑菌浓度实验(MIC)和生长曲线实验测试PPIX-PEINPs的抗菌性能,PPIX-PEINPs对E.coli、P.aeruginosa、S.aureus和S.epidermidis四种细菌的MIC值分别为850,212.5,425和26.6μg/mL。结果显示:PPIX-PEINPs对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用。在635nm激光照射下,低于MIC浓度(10μg/mL)的PPIX-PEINPs产生ROS,能够完全抑制革兰氏阳性菌的生长。由此可知PPIX-PEINPs对革兰氏阳性菌存在光动力协同抗菌活性。此外,PPIX-PEINPs发射出的红色荧光有助于通过流式细胞仪和CLSM识别不同种类的细菌。

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