摘要目的 检测Lonp1蛋白在食管癌组织和细胞中的表达情况,研究Lonp1蛋白对食管癌细胞侵袭,迁移,增殖等恶性表型的影响,进一步探索 Lonp1 蛋白在食管癌中的作用机制。<br> 方法 利用生物学信息库检索 Lonp1 蛋白,对其进行生物信息学分析。免疫组织化学染色方法检测食管癌配对的 75 例的组织芯片(上海芯超生物科技有限公司)中癌和癌旁的 Lonp1 蛋白表达情况。Western blot 实验检测食管癌细胞中 Lonp1 蛋白的表达情况,检测不同食管癌细胞株Lonp1蛋白的表达量。Primer 5.0软件设计Lonp1蛋白的引物,同时进行引物特异性验证。RT-PCR检测食管癌细胞系中Lonp1的mRNA的表达量。进行食管癌组织的RNA抽提,通过RT-PCR检测癌和癌旁Lonp1蛋白的表达量。选取高表达Lonp1蛋白的细胞株YES2和 KYSE150,利用RNAi技术进行敲降实验。Transwell实验和集落形成实验分别检测敲降Lonp1蛋白对食管癌细胞侵袭,迁移和增殖的能力的影响。选取低表达 Lonp1 蛋白细胞细胞株 KYSE30和KYSE450利用质粒转染进行过表达实验。Transwell实验和集落形成实验分别检测过表达Lonp1蛋白对食管癌细胞侵袭,迁移和增殖能力影响。Western blot实验检测Lonp1蛋白对PI3K/AKT通路和EMT途径的影响。进行天然小分子药物筛选,发现天然茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯不仅对食管癌细胞有明显抑制作用,而且还对Lonp1蛋白存在着影响。<br> 结果 食管癌组织芯片统计 75 例 ESCC 样本中 Lonp1 阳性表达的百分比为 88%(66/75),Lonp1 阴性百分比 12%(9/75)。Lonp1 蛋白表达量癌明显高于癌旁。Lonp1 蛋白在食管癌细胞系表达量明显高于永生化食管上皮细胞株。RNAi 干扰处理后 YES2 和 KYSE150 细胞株 Lonp1 蛋白的表达量明显低于对照 NC 组。同时,与 NC 对照组相比,敲降组 YES2 和 KYSE150 细胞的侵袭,迁移和集落形成能力明显下降(P<0.05) 。质粒过表达KYSE30和 KYSE450细株胞后Lonp1蛋白的表达量明显高于空载组。同时,与空载对照组相比,过表达组KYSE30和 KYSE450细胞的侵袭、迁移和集落形成能力明显增加(P<0.05)。食管癌细胞 YES2 和 KYSE150中敲降Lonp1蛋白,PI3K和磷酸化Ser473位点AKT蛋白表达明显降低。食管癌细胞KYSE30和KYSE450 中过表达 Lonp1 蛋白,N-cadherin,Vimentin 蛋白表达量增加,E-cadherin 蛋白表达量降低。通过小分子药物筛选发现天然茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)浓度增加食管癌细胞株 KYSE150 的 Lonp1 蛋白表达量降低。<br> 结论 Lonp1 蛋白在食管癌组织和细胞系中均高表达,Lonp1 蛋白的表达量与患者的TNM分期及淋巴转移情况存在明显相关性。敲降Lonp1蛋白可有效抑制食管癌细胞的侵袭,迁移和集落形成能力。过表达 Lonp1 蛋白可明显增强食管癌细胞的侵袭,迁移和集落形成能力。敲降 Lonp1 蛋白可以抑制 PI3K/AKT 信号通路。过表达 Lonp1 蛋白促进了食管癌上皮细胞-间充质转化(EMT)途径。表没食子儿茶素没食子酸酯可以抑制食管癌增殖并且诱导其凋亡。Lonp1 蛋白表达量随着表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)浓度增加逐渐降低。
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