检索历史 清除

摘要第一部分 PTEN基因在轻度维吾尔族T2DM外周血单个核细胞中的表达<br>　　目的<br>　　胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)是2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus, T2DM)的中心环节,贯穿T2DM病程始终.10号染色体上缺失的磷酸酶和张力同源物(Phosphatase and tensin homologue on chromosome 10,PTEN)可能在IR的发生机制中起着举足轻重的作用,有望作为改善IR的一个新靶点.本研究分析与比较PTEN基因在新疆维吾尔族轻度T2DM和正常糖耐量(Normal glucose tolerance,NGT)对照组外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达情况,旨在探讨在新疆维吾尔族轻度T2DM中PTEN的表达情况及其在T2DM发病机制的作用.<br>　　方法<br>　　本研究运用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)与免疫印迹(Western blot)技术分别检测PTEN基因在新疆维吾尔族轻度T2DM和NGT组PBMCs中的mRNA及其蛋白水平的表达情况.<br>　　结果<br>　　(1)新疆维吾尔族轻度 T2DM 患者 PTEN 基因 mRNA 水平显著高于 NGT 组.PTEN在NGT组样本中的相对转录水平为1,而在维吾尔族轻度T2DM样本中的相对转录水平为3.5(min = 0.000211,max = 0.000879,SD:0.0001765,t检验,P<0.05);<br>　　(2)维吾尔族 T2DM 患者 PTEN 基因蛋白水平均显著高于对照组.(NGT:0.67±0.29, T2DM:0.88±0.40,ttest,P= 0.0041),伴随AKT基因磷酸水平减弱(ttest, P=0.013);<br>　　(3)评估了PTEN的转录及翻译水平与一般临床资料特征之间的关系.我们研究发现低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)与PTEN的蛋白表达水平呈正相关趋势,且有显著统计学差异,其余临床特征PTEN的转录水平与之间没有显著关联.<br>　　结论<br>　　该部分研究结果提示PTEN 在维吾尔族轻度T2DM中表达上调可导致IR.<br>　　第二部分 新疆维吾尔族轻度T2DM外周血单个核细胞中PTEN基因DNA甲基化修饰水平<br>　　目的<br>　　在表观遗传学中DNA甲基化是人类基因组中主要的遗传标记.基因启动子区的甲基化与转录抑制有关,而基因异常甲基化通常与基因表达相关.本研究分析并比较新疆维吾尔族轻度T2DM和NGT组PBMCs中PTEN基因启动子区DNA甲基化水平,筛选可作为T2DM生物标志物的DNA甲基化位点,进一步探讨PTEN基因启动子区异常DNA甲基化水平与新疆维吾尔族轻度T2DM发病机制的关系,并结合第一部分研究结果,探讨PTEN的表达与其启动子区DNA甲基化修饰水平的相关性.<br>　　方法<br>　　本部分运用 MassARRAY 平台高通量分析并比较新疆维吾尔族轻度 T2DM 和NGT组PBMC中PTEN基因启动子区整体及单个CpG位点DNA甲基化修饰水平.<br>　　结果<br>　　(1)我们选取相对于PTEN基因翻译起始位点(ATG),-2,515 bp至-2,186 bp启动子区域检测甲基化水平.运用MassARRAY平台定量检测330 bp扩增子区域.该启动子区域含有21个CpG位点的,我们将其分成15个CpG单位.在这些单位中, 3个CpG单位(6个CpG位点)未成功获得检测结果.最终数据由来自94个样本的12个CpG单位组成.<br>　　(2)维吾尔族轻度T2DM样本的平均整体DNA甲基化水平范围为2.08%至5.58%,对照组样本中平均DNA甲基化频率范围为4.17%至11.25%.维吾尔族轻度T2DM样本中PTEN的异常甲基化显著低于NGT样本,平均分别为3.27%和7.28%(t检验,P<0.0001).此外,我们对维吾尔族轻度T2DM和NGT样本的CpG单位甲基化数据进行双向分层聚类分析,结果提示两组存在明显不同的DNA甲基化模式.<br>　　(3)对于不同的样本,各个 CpG 位点 DNA 甲基化水平存在变异性.维吾尔族轻度T2DM样本中大多数CpG单位的DNA甲基化水平低于NGT样本,其中CpG_9单位和CpG_21单位DNA甲基化修饰水平在两组之间存在显著差异(单向ANOVA, P<0.05).<br>　　(4)在维吾尔族轻度T2DM和NGT组中,我们确定了DNA甲基化水平与PTEN转录水平呈负相关(95%CI:0.00009339至0.00002474,P= 0.001,r = 0.45).线性回归分析显示PTEN DNA甲基化水平与PTEN蛋白表达亦呈显著负相关(双尾Pearson检验,95%CI为:0.1897至0.03355,P= 0.006,r = 0.38).<br>　　(5)在轻度T2DM组中,CpG_21甲基化水平与临床特征均无显著相关性.而在轻度T2DM组中,多数临床指标与CpG_9甲基化水平无显著相关性,但是我们研究发现CpG_9单位甲基化水平与糖尿病患者BMI、HOMA-IR、腰围呈显著负相关.<br>　　结论<br>　　1)在维吾尔族轻度T2DM患者中,PTEN DNA低甲基化可能是导致PTEN高表达的原因,PTEN低甲基化水平伴随着PI3K/AKT信号通路磷酸化的降低,进而导致IR;<br>　　2) CpG_9位点DNA甲基化水平与IR相关表型有关,对揭示维吾尔族T2DM发生IR的机制具有一定的意义.