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摘要第一部分 胰腺癌中TFEB与肿瘤生物学行为关系的研究<br>　　背景 胰腺癌是一种高致死的疾病，多项研究表明自噬参与了胰腺癌的多种恶性生物学行为，并与其侵袭转移能力密切相关。目前TFEB被认为是调控自噬溶酶体通路的关键因子。因此，进一步明确TFEB与胰腺癌恶性生物学行为的关系有望成为改善胰腺癌治疗现状的关键。<br>　　方法 采用免疫组化、实时PCR和蛋白印迹等方式检测TFEB在临床胰腺导管腺癌组织中水平，探究其与胰腺癌病理分级、临床分期和预后的关系。采用慢病毒技术干预胰腺癌细胞中TFEB的表达，利用体内外实验模型检测其与胰腺癌恶性生物学行为的关系。<br>　　结果 通过免疫组化、实时PCR和蛋白印迹实验，我们发现TFEB在胰腺癌肿瘤组织中表达水平高于正常胰腺组织。免疫组化中胰腺癌TFEB的表达情况与胰腺癌的分化程度密切相关，病理分化越差，TFEB反而表达量高。通过Kaplan-Meier分析癌组织中TFEB表达与胰腺癌患者总体存活之间的相关性，发现高表达组TFEB患者预后更差。利用CCK8、平板克隆和皮下成瘤实验，我们发现在胰腺癌细胞中抑制TFEB能抑制胰腺癌细胞的增殖能力。利用划痕实验、Transwell和小鼠脾包膜注射胰腺癌肝转移模型，我们发现抑制TFEB能够抑制胰腺癌细胞的侵袭迁移能力。<br>　　结论 TFEB在胰腺癌中高表达，且与分化差和不良预后正相关。而抑制TFEB能抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。<br>　　第二部分 胰腺癌中TFEB上下游调控机制的研究<br>　　背景 胰腺癌是最具侵袭性的肿瘤之一。在肿瘤细胞发生迁移的过程中，整合素的内吞和黏附信号的转导扮演了重要角色。TFEB介导的CLEAR网络涉及到极其广阔的下游调节，然而TFEB如何调控下游分子，何种因素调控TFEB值得进一步探索。<br>　　方法 生物信息学分析和蛋白质印迹用来鉴定TGF-β与TFEB的相关关系。透射电子显微镜和共聚焦荧光实验用于测定 TFEB 是 TGF-β 诱导的自噬的关键因素。利用transwell、划痕实验(体外实验)和裸鼠肝转移模型(体内实验)来检测TFEB依赖的自噬与胰腺癌肿瘤生物学的关系。双荧光素酶报告实验和启动子序列分析用于评估TGF-β诱导的TFEB对RAB5A基因启动子活性的调节。最后生物学信息分析RAB5A与胰腺癌病理分级、临床分期和预后的关系。<br>　　结果 我们证实TGF-β通过经典smad途径在Smad4阳性PC细胞中的能够诱导TFEB表达，并促进TFEB介导的自噬激活。由TGF-β引起的TFEB驱动的自噬调节依赖于RAB5A的整合素α5β1(Itgα5β1)内吞作用并促进胰腺癌的进展。我们进一步表明高表达的RAB5A能预测胰腺癌患者预后不良。<br>　　结论 我们的研究结果表明，TEFB依赖的自噬是TGF-β诱导的PC细胞迁移和转移所必需的，它通过 TGF-β-TFEB-RAB5A 轴促进 Itgα5β1 的内吞作用和粘着斑的解聚。我们的研究结果强调了抑制TFEB驱动的自噬抑制胰腺癌转移的潜在作用。<br>　　第三部分 TFEB抑制剂阿兰内酯对胰腺癌细胞作用的研究<br>　　背景 尽管胰腺癌的手术切除取得进展，但化疗不敏感仍然是胰腺癌治疗的主要障碍。开发新药物或新的药物联用组合是改善胰腺癌治疗现状的关键。<br>　　方法 通过虚拟筛选我们预测天然化合物阿兰内酯是 TFEB 的抑制剂。利用透射电子显微镜和共聚焦显微镜用于评估阿兰内酯对自噬的作用。通过CCK-8、平板克隆实验和皮下成瘤实验评估用阿兰内酯处理后对胰腺癌细胞增殖的影响。通过药物联合指数测量阿兰内酯和奥沙利铂的组合治疗的效果。<br>　　结果 我们发现阿兰内酯由于抑制了 CTSB/CTSD 的表达和活性，引起溶酶体功能损伤而引起自噬体的积累。此外，阿兰内酯在体外和体内抑制胰腺癌细胞的增殖，并增强胰腺癌细胞对奥沙利铂的化疗敏感性。<br>　　结论 我们证实阿兰内酯是 TFEB 的药理学抑制剂，能引起溶酶体功能障碍导致自噬降解抑制。阿兰内酯引起细胞凋亡，并增强了胰腺癌细胞对奥沙利铂的化学敏感性。