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低温等离子体激活液对皮肤鳞状细胞癌细胞的抑制作用

摘要目的皮肤鳞状细胞癌是皮肤常见的恶性肿瘤之一,多好发于老年人群。随着世界人口老龄化趋势日益加剧,皮肤鳞状细胞癌发病率逐年上升。最新数据显示,皮肤鳞状细胞癌发病率的增加和死亡率逐年上升,皮肤鳞癌老年患者的治疗成为临床皮肤科治疗的一大难点。现阶段,皮肤鳞癌治疗方法主要为手术、放化疗及联合治疗。虽然大部分患者可以获得较满意治疗,但对于侵袭性皮肤鳞癌患者,尤其是老年群体,治疗方法局限且疗效较差。大部分患者往往因不能耐受相关治疗而错过最佳治疗时期。低温等离子体激活液是由低温等离子体(cold atmospheric plasma, CAP)处理相关液体产生的一种具有活性的液体。多项研究已证实低温等离子体激活液对体内外多种肿瘤细胞有显著的抑制作用,且对正常细胞组织毒副作用较小。本研究利用空气源低温等离子体装置处理无菌PBS和DMEM制备具有生物活性的低温等离子体激活液,观察激活液对人皮肤鳞状细胞癌细胞的影响及相关机制。<br>  方法本研究主要包括两个部分:细胞活力及相关机制的研究。<br>  首先使用低温等离子体装置分别处理无菌PBS及DMEM,处理时间分别为0s,60s,120s,180s,240s,300s,360s获得CAP-PBS和CAP-DMEM。用获得的激活液立即处理A431细胞和HaCat细胞。该实验利用MTT法测定CAP激活液对皮肤鳞癌细胞及正常皮肤角质细胞增殖的影响。同时,分别采用Annexin-VandPI法检测细胞凋亡,Westernblot检测CAP处理后蛋白PARP及caspase-7的表达,并使用CM-H2DCFDA探针检测CAP激活液处理后A431细胞细胞内活性氧水平。<br>  结果MTT结果显示CA-PBS和CAP-DMEM对A431细胞的增殖能力存在明显的抑制作用,且这种抑制能力呈现明显的剂量依赖性及时间依赖性,但对HaCat细胞的抑制能力较弱。储存后的CAP激活液仍然对A431细胞显示出明显的抑制作用。Annexin-VandPI及Westernblot结果显示CAP激活液对A431细胞的抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的。经CAP激活液处理后,利用CM-H2DCFDA探针测定细胞内ROS,结果显示经CAP-PBS处理后,A431细胞内ROS水平增高,且随着激活液所接受的CAP处理时间的增加,细胞内ROS水平增高越明显,但CAP-DMEM对A431细胞内ROS水平影响不大。<br>  结论CAP激活液对A431细胞存在明显的抑制作用,且这种抑制作用是通过细胞凋亡产生的,CAP诱导细胞内ROS增加可能是导致细胞凋亡的因素之一。

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