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摘要研究背景及目的哺乳动物雷帕霉素靶点复合物1(mTORC1)的异常激活在肿瘤的发生中起着关键性的作用，但确切的机制目前仍未完全获悉。越来越多的证据表明mTORC1介导肿瘤发生的信号传导受microRNAs(miRNAs)的调控。然而，miRNA-125b-5p是否在失调的mTORC1介导的肿瘤中产生作用目前仍然不是很清楚。因此，本研究既是着眼于miR-125b-5p参与mTORC1介导的肿瘤的发生发展的机制的研究。<br>　　方法1)在前期的研究工作中，通过miRNA基因芯片分析，我们发现与对照组小鼠胚胎成纤维细胞(Tsc2+/+MEFs)相比，Tsc2缺失的小鼠胚胎成纤维细胞(Tsc2-/-MEFs)中miR-125b-5p的表达明显下调。通过实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)进一步证实。而且经过雷帕霉素(rapamycin)处理或shRaptor干扰能够恢复Tsc2-/-MEFs中的miR-125b-5p的表达。2)分别通过蛋白免疫印记实验(WB实验)和qRT-PCR，检测Tsc1-/-MEFs或者Tsc2-/-MEFs中STAT3的表达量的变化。3)将miR-125b-5p模拟物(miR-125b-5p mimics)转染入Tsc1-/-MEF或者Tsc2-/-MEFs，以及miR-125b-5p抑制剂(miR-125b-5p inhibitors )转染入Tsc1+/+MEFs或者Tsc2+/+MEFs，然后用qRT-PCR检测每组miR-125b-5p的表达，WB检测各组STAT3的表达。4)构建过表达miR-125b-5p的Tsc1-/-MEFs或者Tsc2-/-MEFs，qRT-PCR检测miR-125b-5p表达，MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力。5)将构建好的过表达miR-125b-5p的Tsc2-/-MEFs以及其对照细胞分别皮下注射到裸鼠体内诱导肿瘤形成，接着密切监测肿瘤体积，重量，裸鼠体重变化。将取出的肿瘤组织运用苏木精-伊红染色法(HE)和免疫组织化学染色分析法(IHC)进行分析；提取肿瘤组织蛋白，WB检测实验组细胞和对照组细胞相关蛋白表达变化。6)运用Targetscan，miRanda或其他软件在线预测小鼠STAT3基因上的miR-125b-5p的结合位点，找出结合为点后对其结合位点进行突变，应用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光素酶的相对活性。7)将表达STAT3shRNA的慢病毒载体转导至Tsc1-/-MEFs或者Tsc2-/-MEFs，WB实验分别检测两组STAT3蛋白表达变化。同时进行克隆集落形成实验检测细胞增殖能力。<br>　　结果1)实验中我们证明了Tsc1或Tsc2的缺失可介导mTORC1的活化，从而下调miR-125b-5p及上调STAT3的表达。2)异位表达miR-125b-5p后细胞的增殖能力及克隆形成能力均受到明显抑制。裸鼠成瘤实验中过表达miR-125b-5p组较对照组肿瘤生长速度，体积，重量均明显受到抑制。3)双荧光素酶报告基因实验中野生型和突变型荧光素酶的活性表达具有显著差异。4)慢病毒介导敲低STAT3后，WB检测发现STAT3表达量明显降低，qRT-PCR检测miR-125b-5p的表达量，发现敲低STAT3后miR-125b-5p的表达量显著升高。<br>　　结论由Tsc1或Tsc2缺失介导的活化的mTORC1是通过抑制miR-125b-5p的表达以及上调STAT3来促进细胞增殖及肿瘤生长，并阐明了该信号通路介导的肿瘤的发生机制。