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摘要目的：<br>　　本文旨在探讨STAT3抑制剂Napabucasin（Napa）对人卵巢癌SKOV-3细胞的体外抑制作用及分子机理，并进一步研究Napa与蛋白酶体抑制剂MG132对SKOV-3细胞的联合给药效果及协同抗癌机制，为STAT3抑制剂在卵巢癌治疗中的应用提供理论依据。<br>　　方法：<br>　　1.通过MTT实验检测Napa对SKOV-3细胞的增殖抑制作用。<br>　　2.使用流式细胞术评估Napa对SKOV-3细胞周期分布的影响；采用WesternBlot方法检测Napa对SKOV-3细胞周期相关蛋白p21、cyclinB1和cdc2表达的影响；利用qRT-PCR方法研究Napa对SKOV-3细胞p21mRNA水平的影响。<br>　　3.采用流式细胞术评估Napa是否具有诱导SKOV-3细胞凋亡的作用。<br>　　4.通过各种实验技术评估Napa在SKOV-3细胞中诱导自噬的能力，包括MDC染色、WesternBlot以及mRFP-GFP-LC3质粒转染。<br>　　5.使用自噬抑制剂Baf-A1抑制自噬后，利用MTT法检测Napa对SKOV-3细胞抗肿瘤活性的变化。<br>　　6.通过伤口愈合实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验方法研究Napa对SKOV-3细胞迁移和侵袭的影响；WesternBlot方法检测Napa对转移相关蛋白Integrinβ1磷酸化和uPA表达水平的影响。<br>　　7.应用Chou-Talalay法研究Napa与MG132联合应用对SKOV-3细胞的抗肿瘤作用效果，同时利用CalcuSyn软件计算联合给药指数（Fa-CI值），分析两药联合是否具有协同抗肿瘤的作用。<br>　　8.通过细胞周期实验、细胞凋亡实验和WesternBlot实验检测Napa与MG132联合应用对SKOV-3细胞周期分布、诱导凋亡的作用及其分子机制；应用MDC染色、WesternBlot实验和mRFP-GFP-LC3质粒转染技术评估Napa与MG132联合应用在SKOV-3细胞中诱导自噬的能力。<br>　　结果：<br>　　1.Napa可显著抑制SKOV-3细胞的增殖活性。MTT结果显示，Napa以剂量依赖性方式抑制SKOV-3细胞生长增殖，IC50值为0.649μM。<br>　　2.Napa对SKOV-3细胞具有周期阻滞作用。流式细胞术结果显示Napa呈剂量依赖性地将SKOV-3细胞周期分布阻滞于G2/M期，Napa显著增加了p21蛋白的表达，但对cyclinB1、cdc-2蛋白的表达没有影响。qRT-PCR的结果显示，Napa处理SKOV-3细胞后，p21mRNA表达水平也明显上升。<br>　　3.将Napa作用于SKOV-3细胞后未观察到明显的诱导凋亡的作用。<br>　　4.Napa具有诱导SKOV-3细胞发生自噬的作用。MDC染色显示，Napa作用后SKOV-3细胞核周围绿色荧光点的数量明显增加，同时荧光强度明显增强；WesternBlot实验结果显示自噬标志物LC3-II和Atg5的表达升高，p62蛋白的表达下降；激光共聚焦显微镜观察结果显示SKOV-3细胞从自噬体的形成到自噬溶酶体的降解过程是顺畅的。<br>　　5.利用自噬抑制剂Baf-A1阻断自噬后，Napa对SKOV-3细胞的抑制作用增强，说明Napa诱导的自噬有利于SKOV-3的存活。<br>　　6.Napa具有抑制SKOV-3细胞迁移和侵袭的作用。伤口愈合实验和Transwell迁移实验结果表明，Napa处理后SKOV-3细胞的迁移率显著降低。同样，Transwell侵袭实验结果显示，Napa处理后SKOV-3细胞的侵袭率也明显下降。WesternBlot结果显示，Napa通过降低细胞侵袭转移调控蛋白Integrinβ1的活性和uPA的表达抑制细胞迁移和侵袭。<br>　　7.Napa与MG132在IC50Napa∶2×IC50MG132药物浓度比时，联合用药指数CI值＜1，表明该浓度比下药物联合具有协同作用。<br>　　8.药物协同作用机制研究表明，与药物单用组相比，Napa与MG132联合给药诱导细胞凋亡的作用更强，凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3、PARP的裂解片段也明显增加。两药联合诱导细胞自噬的作用较单独给药组更加明显，联合给药诱导的自噬同样对细胞具有保护作用。但联合给药组诱导周期阻滞的作用与单药组相比变化不明显。<br>　　结论：<br>　　1.STAT3抑制剂Napa可显著抑制卵巢癌SKOV-3细胞的生长增殖。其抗癌作用可归因于Napa通过上调周期阻滞蛋白p21诱导细胞周期阻滞于G2/M期。<br>　　2.Napa具有诱导SKOV-3细胞发生自噬的作用，这种自噬作用可降低Napa的抗癌效果。<br>　　3.Napa能够显著抑制SKOV-3细胞迁移和侵袭，提示其具有较好的抗卵巢癌转移能力。<br>　　4.Napa与蛋白酶体抑制剂MG132联合给药具有协同抗肿瘤作用，协同机制主要体现在诱导SKOV-3细胞凋亡。