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摘要小鼠Dlk1-Dio3印记基因簇作为一个重要的印记簇，存在于12号染色体末端占基因组区域1Mb左右。含括父本表达蛋白编码基因Dlk1、Rtl1和Dio3，多种母本表达非编码RNA基因，此外还分布着大量的miRNAs及snoRNAs。这一印记基因簇在小鼠胚胎发育、细胞重编程和遗传性疾病的发生等过程起着重要作用，若区域内印记基因发生异常会致使生长发育紊乱，甚至死亡，故对此区域的研究非常重要。<br>　　目前，Dlk1-Dio3印记基因簇内已发现的三个主要差异甲基化区：IG-DMR、Gtl2-DMR和Dlk1-DMR，都为父本甲基化。本实验室前期发现研究现命名为Meg8-DMR为此区域第一个母本甲基化的差异甲基化区，可能有重要的印记调控功能。<br>　　本课题基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建的Meg8-DMR敲除鼠模型，初步探究Meg8-DMR对于区域内印记基因的影响。首先对课题组前期所获Meg8-DMR敲除的杂合子(Meg8-DMR+/-或Meg8-DMR-/+)，纯合子(Meg8-DMR-/-)，野生型(Meg8-DMR+/+)小鼠胚胎期相关生长发育指标进行观测分析表明，与野生型相比，Meg8-DMR的缺失对小鼠胚胎形态、体重及平均产子数未产生明显影响，但会导致一定比例的胎儿致死。Meg8-DMR单等位敲除小鼠自交，会导致子代小鼠野生型比率偏低(13.98%)。其次通过半定量及定量检测Meg8-DMR敲除对小鼠发育中后期E12.5胚胎及E15.5各组织中相关印记基因表达的影响，提示Meg8-DMR的敲除对区域内基因表达总体未产生明显影响，无统计学差异。但在Meg8-DMR母本敲除及Meg8-DMR亲本双等位敲除小鼠胚胎中，Irm的表达有显著上调趋势。最后通过SNP测序的方法检测Meg8-DMR敲除对于区域内主要印记基因的印记模式影响，结果显示，Meg8-DMR的缺失并不改变区域内主要印记基因Dlk1、Gtl2及Rian的印记模式。<br>　　综上所述，Meg8-DMR的缺失未对小鼠胚胎形态体重等产生明显影响，但会导致一定比例的胎儿致死。在分子水平上，Meg8-DMR的缺失并不影响区域内主要印记基因的印记模式，也未对区域内印记基因表达量产生明显影响，只有同位于Rian内的Irm在Meg8-DMR-/+及Meg8-DMR-/-小鼠中表达量显著上调。研究提示Meg8-DMR可能作为Rian的调控区会明显调控邻近基因的表达量。本研究有助于了解Meg8-DMR在胚胎发育过程中的生物学功能，有助于进一步阐明Meg8-DMR的转录调控机制。