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摘要第一部分pERK1/2在GPR30介导17β雌二醇减轻氯胺酮致发育期大鼠海马神经细胞凋亡中的作用<br>　　目的：评价GPR30介导17β雌二醇是否能通过ERK信号通路改善氯胺酮导致的发育期大鼠大脑海马区神经细胞凋亡。<br>　　方法：7日龄的健康雄性SD大鼠30只，体重11~18g，按照随机数字表法分为5组(n=6)：对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、17β雌二醇+氯胺酮组(EK组)、GPR30激动剂G1+氯胺酮组(G1K组)和GPR30抑制剂G15+17β雌二醇+氯胺酮组(G15EK组)。K组给予腹腔注射氯胺酮75mg/kg，EK组给予皮下注射17β雌二醇600μg/kg和腹腔注射氯胺酮75mg/kg，G1K组给予皮下注射GPR30激动剂G1200μg/kg和腹腔注射氯胺酮75mg/kg，G15EK组给予皮下注射抑制剂G15300μg/kg和17β雌二醇600μg/kg，腹腔注射氯胺酮75mg/kg，C组腹腔注射等量生理盐水。每隔24h给予大鼠注射一次，连续注射3天。在整个麻醉过程当中，将所有大鼠置于保温箱中，温度设置为26~28℃。密切观察大鼠的呼吸频率变化及皮肤黏膜颜色变化情况，持续给予大鼠2L/min低氧流量。待幼鼠翻正反射恢复后，将其一同放回笼中(控制幼鼠与母鼠分离时间不能超过5h)。在末次给药结束后24h时，采用免疫组化方法检测其海马组织中cleavedcaspase-3蛋白水平；采用Westernblot方法检测其海马组织中caspase-12、cleavedcaspase-3、ERK1/2和pERK1/2蛋白水平。<br>　　结果：<br>　　1.免疫组化结果显示：与C组比较，K组海马组织中cleavedcaspase-3蛋白表达上调，差异有统计学意义(P＜0.05)；与K组比较，EK组和G1K组海马组织中cleavedcaspase-3蛋白表达下调，差异有统计学意义(P＜0.05)；与EK组和G1K组比较，G15EK组海马组织中cleavedcaspase-3蛋白表达上调，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　2.Westernblot结果显示：五组海马区ERK1/2表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。与C组比较，K组海马区caspase-12、cleavedcaspase-3表达上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，pERK1/2比值下调，差异有统计学意义(P＜0.05)；与K组比较，EK组和G1K组海马区caspase-12、cleavedcaspase-3表达下调，差异有统计学意义(P＜0.05)，pERK1/2比值上调，差异有统计学意义(P＜0.05)；与EK组和G1K组比较，G15EK组海马区caspase-12、cleavedcaspase-3表达上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，pERK1/2比值下调，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论：GPR30介导17β雌二醇可通过激活ERK信号通路改善氯胺酮致发育期大鼠海马神经细胞凋亡。<br>　　第二部分GPR30介导17β雌二醇在减轻氯胺酮致发育期大鼠远期学习记忆功能障碍中的作用机制<br>　　目的：评价GPR30在17β雌二醇对氯胺酮致发育期大鼠远期学习记忆功能障碍中的作用及其机制。<br>　　方法：7日龄的健康雄性SD大鼠30只，体重11~18g，按照随机数字表法分为5组(n=6)：对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、17β雌二醇+氯胺酮组(EK组)、GPR30激动剂G1+氯胺酮组(G1K组)和GPR30抑制剂G15+17β雌二醇+氯胺酮组(G15EK组)。K组给予腹腔注射氯胺酮75mg/kg，EK组给予皮下注射17β雌二醇600μg/kg和腹腔注射氯胺酮75mg/kg，G1K组给予皮下注射GPR30激动剂G1200μg/kg和腹腔注射氯胺酮75mg/kg，G15EK组给予皮下注射抑制剂G15300μg/kg和17β雌二醇600μg/kg，腹腔注射氯胺酮75mg/kg，C组给予腹腔注射等量生理盐水。每隔24h给予大鼠注射一次，连续注射3天。在整个麻醉过程当中，将所有大鼠置于保温箱中，温度设置为26~28℃。密切观察大鼠呼吸频率变化及皮肤黏膜颜色变化情况，持续给予大鼠2L/min低氧流量。待翻正反射恢复后，将幼鼠一同放回笼中(控制幼鼠与母鼠分离时间不能超过5h)。所有大鼠继续饲养至60日龄，采用Morris水迷宫方法检测各组大鼠学习记忆功能。在Morris水迷宫测试结束后，断头取脑分别采用ELISA法检测海马乙酰胆碱酯酶(AchE)活力和乙酰胆碱(Ach)水平。<br>　　结果：<br>　　1.Morris水迷宫结果显示：定位航行实验中，每组大鼠第1~5天逃避潜伏期比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；五组大鼠第1~2天逃避潜伏期比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；与C组比较，K组大鼠第3~5天逃避潜伏期延长，差异有统计学意义(P＜0.05)；与K组比较，EK组和G1K组大鼠第3~5天逃避潜伏期缩短，差异有统计学意义(P＜0.05)；与EK组和G1K组比较，G15EK组大鼠第3~5天逃避潜伏期延长，差异有统计学意义(P＜0.05)。空间探索实验中，C组、EK组和G1K组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；与C组比较，K组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比减少，差异有统计学意义(P＜0.05)；与K组比较，EK组和G1K组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比增加，差异有统计学意义(P＜0.05)；与EK组和G1K组比较，G15EK组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比减少，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　2.ELISA结果显示：与C组比较，K组海马组织AchE表达上调和Ach表达下调，差异有统计学意义(P＜0.05)；与K组比较，EK组和G1K组海马组织AchE表达下调和Ach表达上调，差异有统计学意义(P＜0.05)；与EK组和G1K组比较，G15EK组海马组织AchE表达水平上调和Ach表达下调，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论：GPR30介导17β雌二醇改善氯胺酮导致的发育期大鼠远期学习记忆功能障碍，其机制可能与调节海马Ach和AchE表达水平有关。