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摘要辅酶II依赖性视黄醛脱氢/还原酶（NADP(H)-dependentretinoldehydrogenase/reductase，NRDR)是本实验室黄东阳教授于1997年在日本工作期间首次从兔肝中纯化并鉴定的一种短链脱氢酶/还原酶。人的NRDR蛋白编码基因DHRS4(dehydrogenase/reductase(SDRfamily)member4)位于人类14号染色体长臂上（14q11.2）。早期研究发现该蛋白具有视黄醇脱氢酶的活性，参与视黄酸的合成的第一个步骤，能将视黄醇转化为视黄醛。研究还发现，NRDR对固醇类激素、维生素K3、苯基靛红物质显示出不同的羰基还原酶催化活性。目前，NRDR蛋白除以上酶学作用外其它功能不明，其研究一直无较大进展。为进一步研究DHRS4的生物学功能，我们利用CRISPR/Cas9技术在宫颈癌细胞株HeLa和肝癌细胞株HepG2中对DHRS4进行基因敲除。通过设计DHRS4基因敲除的向导序列（gRNA）、构建能够表达Cas9蛋白并且能够转录向导序列的质粒、对HeLa细胞进行转染和初步药物筛选，得到了NRDR表达量明显减少的细胞。以往进行单克隆筛选的经典方法是96孔板极限筛选法，但存在细胞生长缓慢、实验效率低的缺点。为提高实验效率，尽快获得DHRS4基因敲除的单克隆细胞系，本研究使用改良实验方法，在筛选中使用克隆环获取单克隆细胞的方法对初步药物筛选后的细胞进行进一步单克隆细胞筛选，快速得到多株单克隆细胞系。随后，我们通过测序进一步确认多株DHRS4基因完全敲除的宫颈癌细胞株HeLa和肝癌细胞株HepG2。此部分工作是我们首次建立DHRS4基因敲除的细胞株，为我们后续DHRS4基因新功能的探索研究提供了重要的细胞模型和有力的技术支持。