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摘要背景与目的：<br>　　肺癌是目前全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。而在肺癌中，非小细胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，以下简称NSCLC）约占80%，约75%的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。在非小细胞肺癌中，驱动肿瘤发生和发展的分子改变的发现，已经彻底改变了该疾病的临床治疗方式。这种疾病的治疗方法主要是基于分子靶点的存在与否。与传统化疗方法相比，这种精确的药物治疗方法能够使患者的预后和生活质量获得显著改善。因此，我们有必要寻找新的肺癌发生标志物和治疗靶点，研发出更多的靶向药物，使肺癌患者获得更好的治疗。<br>　　研究发现，锚蛋白重复结构域(Ankyrinrepeatdomains,以下简称ANKRD)，由大约30-34个氨基酸的串联基序组成，其功能是充当介导蛋白质与蛋白质之间相互作用的支架。含ANKRD的蛋白涉及多种功能，如细胞周期调控、转录调控、细胞骨架相互作用、信号转导、发育、细胞内转运、性别分化等，也可作为毒素，并直接参与肿瘤的发展。在前期的研究中，我们对同一NSCLC患者的癌和癌旁组织标本进行高通量基因芯片检测分析，发现ANKRD22基因在肺癌组织中的表达较癌旁组织高，提示其可能与肺癌细胞的发生、发展有关，但其在NSCLC发病过程中的作用尚未有明确报道，因此，本研究旨在探讨ANKRD22在NSCLC中的表达及其对NSCLC细胞生物学功能的调控作用。<br>　　方法：<br>　　1.通过实时荧光定量PCR检测各NSCLC细胞株中ANKRD22的相对表达量，从中分别筛选出ANKRD22相对表达量最高和最低的细胞进行下一步功能实验。<br>　　2.通过稳定转染构建各细胞株，实时荧光定量PCR检测出各细胞的ANKRD22相对表达量，以验证细胞株是否构建成功。<br>　　3.在各细胞株中，通过划痕实验和MTT细胞增殖实验检测出ANKRD22对各细胞株的迁移和增殖能力的影响。<br>　　4.通过平板克隆形成实验、EDU法细胞增殖检测实验、细胞周期实验和免疫共沉淀实验进一步研究ANKRD22调控细胞增殖的机制。<br>　　5.通过药物顺铂（DDP）诱导细胞凋亡，检测ANKRD22在不同药物浓度影响下的细胞凋亡。<br>　　6.通过免疫共沉淀实验，检测ANKRD22与FUBP1之间的关系。<br>　　7.通过实时荧光定量PCR检测同一NSCLC患者癌和癌旁组织中ANKRD22的相对表达量，结合临床资料分析ANKRD22表达差异与患者临床特征和预后的相关性。<br>　　结果：<br>　　1.通过实时荧光定量PCR法对A549、H1299、PC9、H1975、H1650、HCC827等六种NSCLC细胞进行ANKRD22相对表达量的检测，其中H1975细胞的ANKRD22的表达量最高，而A549细胞的ANKRD22的表达量最低。<br>　　2.稳定转染成功构建ANKRD22低表达-H1975细胞株和ANKRD22过表达-A549细胞株。<br>　　3.通过划痕实验和MTT细胞增殖实验发现，ANKRD22能够调控NSCLC细胞的增殖，但与NSCLC细胞的迁移无明显相关性。<br>　　4.通过平板克隆形成实验、EDU法细胞增殖检测实验和细胞周期实验发现干扰ANKRD22的表达能够明显抑制NSCLC细胞的增殖，并阻滞细胞周期进程（P＜0.05）；而上调ANKRD22的表达能够明显促进NSCLC细胞的增殖，并加快细胞周期进程（P＜0.05）。<br>　　5.通过细胞凋亡实验发现上调ANKRD22的表达可以明显抑制细胞的凋亡（P＜0.01），并且能够降低NSCLC细胞对顺铂的敏感性。<br>　　6.通过免疫共沉淀实验，发现ANKRD22能够与FUBP1结合，这提示ANKRD22可能是通过与FUBP1结合参与调控细胞增殖。<br>　　7.临床组织样本的研究发现：ANKRD22在癌组织中明显高表达于癌旁组织（P＜0.05），ANKRD22高表达的NSCLC患者术后复发时间要早于低表达患者（P＜0.05），而且其总生存时间也较低表达患者短（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.ANKRD22参与调控NSCLC的增殖。<br>　　2.ANKRD22可能是通过与FUBP1结合参与调控细胞增殖。<br>　　3.同一NSCLC患者癌组织中ANKRD22的表达量明显高于癌旁组织，且ANKRD22高表达NSCLC患者术后复发时间要早于低表达患者，其总生存时间也较低表达患者短。