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摘要背景：<br>　　雄激素性脱发（androgenicalopecia,AGA）是最常见的脱发类型之一。这是一种毛囊逐渐小型化的脱发疾病，在中国影响21.3％的男性（MalePatternHairLoss,MPHL）和6.0％的女性（FemalePatternHairLoss,FPHL）[1]。AGA可以发生在青少年和中年，但脱发的进展在两者之间显著不同。当男性在青年时期出现脱发时，如诺伍德和汉密尔顿量表所述，它往往会导致男性秃顶;女性脱发的特征是弥漫性脱发[2-4]。目前，美国FDA批准用于AGA的药物治疗仅为非那雄胺和米诺地尔。非那雄胺和米诺地尔的治疗效果明显，但也存在一些问题，如非那雄胺，可能影响男性生殖功能;米诺地尔则是可以被皮肤吸收，有可能导致心率过快。此外，两者都可能增加使用者皮肤病的风险[5]。尽管使用药物延缓AGA的效果是显而易见的，但这些药物只能使部分头发再生，并且需要长期使用这些药物才能维持头发的生长[7]。目前，毛发移植是治疗脱发最有效的方法。然而，对于早期MPHL和FPHL以及供体可用性差的患者，毛发移植是不可行的。这些方法都不能完全改善雄激素脱发的问题。因此，近年来，每个脱发患者都在寻求新的AGA治疗方法。其中，再生疗法在脱发治疗中起着越来越重要的作用[8]。<br>　　血管基质片段（StromalVascularFraction,SVF）在再生疗法中具有突出的作用。它是一种来自脂肪的再生细胞群[9]，含有大量血管脂肪基质细胞（AdiposederivedStromalCell,ADSVCs）。SVF具有抗细胞凋亡，抗炎，抗氧化作用。研究表明，许多脱发患者都有一定程度的毛囊慢性炎症反应，在毛囊周围存在着炎症细胞的浸润，而ADSVCs可以通过增强抗氧化和抗炎机制来预防炎症和毛囊损伤。此外，ADSVCs可以通过旁分泌调节血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocytegrowthfactor,HGF）、胰岛素样生长因子（insulinlikegrowthfactor,IGF）、血小板衍生生长因子（Plateletderivedgrowthfactor，PDGF）等特定生长因子影响毛发的再生[8]。DavidPerez-Meza等人将提取的自体脂肪SVF移植到人头皮上治疗脱发，发现脱发患者毛发数量和质量有着明显改善[11]。另外，富含血小板血浆（Platelet-richplasma,PRP）的注射是另一种治疗AGA的新方法。PRP有助于组织修复、伤口愈合，还可以刺激血小板并释放各种生长因子，例如VEGF，转化生长因子（Transforminggrowthfactorbeta,TGF）和表皮生长因子（Epidermalgrowthfactor,EGF）[13]，还会激活几种抗凋亡因子，这些因子都有利于毛发的再生[14-15]。研究表明，脱发患者用PRP注射治疗后，脱发率明显降低，头发密度明显改善，而且这些自己体内提取的组织治疗脱发副作用小[16]。综上所述，SVF和PRP都对改善脱发有显著影响，然而关于SVF和PRP促进毛发生长和再生的机制知之甚少，也并没有太多文献去对比二者之间对毛发再生影响的差异。<br>　　目的：<br>　　1、探索诱导毛发再生的影响因素。<br>　　2、了解PRP及SVF对毛发再生的影响机制。<br>　　3、寻找治疗AGA更加快捷高效低副作用的临床方法。<br>　　方法：<br>　　1、SD大鼠PRP的分离和SVF的制备。<br>　　2、中性蛋白酶可消化胚胎小鼠的皮肤，可得到真皮和表皮。利用胶原酶消化真皮层可得到大量的真皮细胞；表皮层利用胰酶消化可获得大量的表皮细胞。<br>　　3、裸鼠体内小室模型的构建。<br>　　4、本实验将分为三组，以同样2×107cells/L的细胞密度分别在“小室法体内毛囊重建模型”中加入(1)真皮细胞/表皮细胞组；(2)SVF混合真皮细胞/表皮细胞组；(3)PRP混合真皮细胞/表皮细胞组。分别观察裸鼠背部毛发的生长情况，并通过病理组织切片染色及免疫荧光等方法，观察不同毛囊的生长情况及差异。<br>　　结果：<br>　　1.用ImageJ软件观察裸鼠背部的毛发，结果显示，三个组中裸鼠的背毛相似。小室模型中，真皮细胞/表皮细胞组与加入了SVF和PRP混合的细胞组对比，SVF组和PRP组毛囊的数量明显增加;这表明SVF和PRP的加入能显著促进毛发生长，其中SVF组毛发生长更密集。<br>　　2．根据蛋白质免疫印迹WB分析，与真皮细胞/表皮细胞组相比，SVF组和PRP组中参与毛发再生的主要蛋白：WNT通道蛋白β-catenin和Lef1；细胞周期蛋白cyclinD1和趋化蛋白趋化蛋白COX2的蛋白表达水平明显增加。其中，SVF组比PRP组测试的蛋白水平增加更显著，这表明SVF和PRP都可以改善调节毛发再生相关蛋白的表达量。而实时定量基因扩增荧光QPCR检测结果显示，与真皮细胞/表皮细胞组相比，SVF组和PRP组中β-catenin，Lef1，cyclinD1和COX2的mRNA表达水平显著增加，提示SVF和PRP可以改善调节毛发再生相关蛋白的mRNA水平表达。<br>　　3．EdU染色的结果显示，与真皮细胞/表皮细胞组相比，SVF组和PRP组中的毛囊数量显著增加。其中，SVF组毛囊数量最多,这表明SVF和PRP都有助于毛囊的增殖。<br>　　4.HE染色结果显示，SVF组和PRP组中毛囊的数量多于真皮细胞/表皮细胞组。此外，SVF组毛囊数量高于PRP组，表明SVF和PRP均可促进毛囊细胞增殖，而SVF促进毛囊的增殖的效果更加优于PRP的效果。<br>　　5.酶联免疫吸附试验ELISA检测中发现细胞因子如VEGF，Wnt/β-catenin和PDGF的检测显示，与真皮细胞/表皮细胞组相比，SVF组和PRP组在Wnt/β-catenin信号通路中，Wnt/β-catenin10b和β-catenin的表达水平显著升高，靶基因VEGF的蛋白表达水平升高，PDGF和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）活性的蛋白表达水平升高。这表明SVF和PRP可以增加Wnt/β-catenin途径相关基因的蛋白表达水平。<br>　　结论：<br>　　SVF和PRP可通过Wnt/β-catenin通路促进VEGF，PDGF等细胞因子的分泌，促进毛囊细胞增殖，促进毛发生长。这些发现为研究SVF和PRP对毛发生长的机制提供了一个全新视角。