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摘要研究目的：<br>　　抗磷脂综合征（antiphospholipidsyndrome,APS）的主要病理基础是血液的高凝状态和大量抗β2GPI抗体（β-2glycoproteinIantibody,β2GPI-Ab）的存在。β2糖蛋白I（β-2glycoproteinI,β2GPⅠ）是抗磷脂抗体（antiphospholipidantibody,aPL）的关键靶抗原，能够与氧化低密度脂蛋白特异性结合。动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）主要影响身体中的大中动脉，粥样斑块中有着复杂的病理改变，血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecell，VSMC）在其中发挥重要作用。aPL促进内皮细胞的炎症和促凝血作用，导致细胞功能紊乱和炎症反应，提示APS与As的相关性。近年来，研究发现VSMC的表型能够发生“巨噬样”改变，并吞噬大量的脂质，形成“泡沫细胞”，参与血管内膜下脂质斑块的形成。<br>　　课题组前期研究发现Toll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物介导大鼠胸主动脉平滑肌细胞株（A7r5）泡沫化过程中发挥重要作用，而其中的具体机制尚未阐明。本文首先探讨TLR4在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5向“巨噬样”细胞表型转化过程中的作用，然后进一步探讨TLR4-c-Jun氨基末端激酶1/2（c-JunN-terminalkinases1/2,JNK1/2）信号通路在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物影响A7r5脂质转运相关分子表达中的作用。<br>　　研究方法：<br>　　（1）实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR，RT-qPCR）和免疫荧光（immunofluorescence，IF）分别检测oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/β2GPⅠ-Ab复合物、β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物和oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab抗体复合物刺激后A7r5细胞中平滑肌细胞骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）、巨噬细胞表面标志物CD68和半乳糖凝集素3（LGALS3）mRNA和蛋白的表达。用TLR4特异性抑制剂TAK-242预处理细胞，观察TLR4是否参与上述过程。<br>　　（2）Westernblot检测oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/β2GPⅠ-Ab复合物、β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物和oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物处理后，A7r5细胞t-JNK1/2和p-JNK1/2（Thr183/Tyr185）的蛋白表达水平。<br>　　（3）RT-qPCR和Westernblot分别检测oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/β2GPⅠ-Ab复合物、β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物和oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物处理后，A7r5细胞CD36、ATP结合盒转运蛋白A1（ATP-bindingcassettetransporterA1,ABCA1）和ATP结合盒转运蛋白G1（ATP-bindingcassettetransporterG1,ABCG1）的mRNA和蛋白表达。用TLR4抑制剂TAK-242和JNK1/2抑制剂SP600125预处理细胞，观察TLR4和JNK1/2是否参与上述过程。<br>　　研究结果：<br>　　（1）oxLDL(30μg/mL)/β2GPⅠ(100μg/mL)/β2GPⅠ-Ab(100μg/mL)复合物能够明显促使A7r5细胞表达巨噬细胞分子标志CD68和LGALS3，同时降低细胞骨架蛋白α-SMA的表达。TAK-242（5μM）能明显抑制复合物诱导的细胞表型改变。<br>　　（2）oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物可以增加血管平滑肌细胞JNK1/2的磷酸化水平。同时，它可以显著增加A7r5细胞表面CD36mRNA和蛋白的表达，抑制细胞ABCA1和ABCG1mRNA与蛋白的表达。<br>　　（3）使用TAK-242（5μM）或SP600125（90nM）预处理细胞后，oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导CD36表达升高和ABCA1、ABCG1表达降低的现象被逆转。<br>　　结论：<br>　　（1）oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5细胞从收缩型向“巨噬样”细胞发生转化，使用TLR4抑制剂TAK-242能够逆转这一现象。<br>　　（2）oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5细胞JNK1/2的磷酸化水平升高，同时促进细胞CD36的表达，并抑制ABCA1和ABCG1的表达。<br>　　（3）使用TAK-242或SP600125对A7r5细胞进行预处理后，oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导CD36表达升高及抑制ABCA1和ABCG1表达的现象被逆转。