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miR-498靶向ZEB2抑制肝癌生长和转移

摘要目的:检测miR-498在肝癌患者肿瘤组织及血清中的表达水平,阐明miR-498在肝癌增殖、迁移侵袭中的生物学作用及分子机制,为肝癌的早期诊断及治疗寻找新的靶点。<br>  方法:提取肝癌患者及健康体检者血清、肝癌患者肿瘤与健康正常组织、肝癌细胞及正常肝细胞总RNA,qRT-PCR检测miR-498的表达水平。采用过表达miR-498质粒转染肝癌细胞,生长曲线及平板克隆实验评价细胞增殖能力,Transwell细胞迁移和Matrigel细胞侵袭实验评价细胞迁移侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期及凋亡变化。通过裸鼠皮下荷瘤实验观察miR-498对肝癌生长的影响。采用生物信息学技术预测miR-498的下游靶点,并通过荧光素酶报告基因实验等进行验证。敲减下游靶基因检测其对肝癌细胞生物学功能的影响,并通过共转染实验明确miR-498对下游靶基因的调控作用。<br>  结果:miR-498在肝癌患者组织、血清及肝癌细胞中表达量显著降低。体外实验发现过表达miR-498能明显抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡并阻滞细胞周期进展。在体内过表达miR-498可抑制肝癌生长。生物信息学检测发现ZEB2(zincfingerE-boxbindinghomeobox2)基因上具有miR-498结合位点,荧光素酶报告基因显示miR-498可以与ZEB23’UTR区域结合。ZEB2在肝癌中表达上调,且与miR-498的表达呈负相关。敲减ZEB2同样可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。共转染实验发现ZEB2可以部分逆转miR-498过表达引起的肝癌细胞功能学改变。<br>  结论:miR-498在肝癌中表达下调,可作为肝癌诊断的潜在指标。miR-498通过下调ZEB2的表达在肝癌细胞中发挥抑癌基因作用。

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