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摘要对于开花植物来说，在适宜的条件，适宜的时间实现从营养生长阶段向生殖生长阶段的转变，对植物发育有着重要的意义。通过对大量突变体的遗传分析，在拟南芥中已经发现了四条主要途径通过调节体内因素和外界环境影响开花时间，自主途径、春化途径、赤霉素途径和光周期途径。植物的开花发育受表观遗传调控。表观遗传是一门新学科，主要研究染色质修饰和染色质重塑等对基因转录表达的调控机制。组蛋白的共价修饰包括赖氨酸的乙酰化、甲基化和精氨酸的甲基化等。组蛋白末端氨基酸共价修饰对植物开花发育的调控作用的研究表明FLC的抑制因子和促进因子通过改变组蛋白氨基酸的共价修饰，影响FLC基因所在区域的染色质重塑，调控FLC的转录表达水平，从而调控开花时间。<br>　　哺乳动物SKB1(Shk1kinase-bingdingprotein1，又名PRMT5，ProteinArgininemethyltransferases5)在调控染色质重塑、基因转录、RNA剪切和细胞增殖与分化过程中起重要作用。拟南芥SKB1基因(At4g31120)与其序列高度同源，在拟南芥基因组仅含有单拷贝SKB1基因。目前关于蛋白质精氨酸甲基转移酶及其催化的精氨酸甲基化修饰在植物发育中的作用还没有任何报道。本论文集中研究了拟南芥精氨酸甲基转移酶SKB1基因调控植物开花发育的遗传和生化机理，获得了如下结果：<br>　　1．通过对拟南芥精氨酸甲基转移酶SKB1的序列分析，发现SKB1含有精氨酸甲基转移酶必需的5个保守序列，并且与哺乳动物的同源蛋白PRMT5在序列上具有很高的相似性。利用原核表达系统纯化His-SKB1重组蛋白，运用切胶回收的方法免疫制备SKB1特异性抗体，研究了SKB1的生化功能。纯化GST-SKB1融合蛋白，利用3H标记的甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(3H- SAM)分析SKB1的甲基转移酶活性发现组蛋白H4是SKB1的特异底物。<br>　　2．获得了两个SKB1T-DNA插入突变体株系，突变体表现出晚花的表型，同时叶色深绿，叶片弯曲。通过转化SKB1cDNA可以回复突变体晚花的表型，超表达SKB1引起拟南芥早花，同时拟南芥开花时间与SKB1的表达量呈正相关，说明SKB1促进植物开花，是拟南芥开花发育的正调控因子。<br>　　3．分析了在不同生理条件下skb1突变体的表型，发现不同光周期处理后，突变体都表现晚花的表型，表明突变体对光周期不敏感；而春化和赤霉素处理则可以部分恢复突变体晚花的表型，由此确定SKB1属于开花自主途径。<br>　　4．RT-PCR分析发现在skb1突变体中FLC的表达量明显高于野生型，同时通过杂交发现flc突变体可以部分恢复skb1突变体晚花的表型，skb1×flc双突变体的开花时间介于野生型和skb1突变体之间。表明FLC过量表达是skb1晚花的原因。<br>　　5．SKB1::GUS融合基因分析，原位杂交以及Western检测SKB1的时空表达模式表明SKB1主要在幼苗的茎顶端分生组织和幼叶中表达，与开花自主途径基因很相似。<br>　　6．利用组蛋白特异位点修饰的抗体，Western检测表明在体内和体外SKB1都可以特异地对称性双甲基化修饰H4R3(H4R3sme2)。<br>　　7．染色质免疫沉淀(ChIP)技术分析表明SKB1特异的结合在FLC基因组DNA启动子区，通过对称性双甲基化修饰组蛋白H4R3调控开花时间。<br>　　综上所述，拟南芥精氨酸甲基转移酶SKB1通过对称性双甲基化目标基因FLC染色质的启动子区域，抑制FLC的表达，从而促进植物开花。本论文不仅阐明了蛋白质精氨酸甲基转移酶SKB1调控开花发育的分子机制，而且还可能揭示表观遗传修饰调控植物发育的新途径。