检索历史 清除

摘要目的：<br>　　口腔扁平苔藓(OLP)是一种慢性炎症性疾病，其病因和发病机制尚不清楚。IκB激酶α(Ikkα)调节的乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(MASPIN)已被证明参与了慢性炎症过程，但MASPIN对OLP慢性炎性反应的作用尚不清楚。因此，本研究的目的是探讨MASPIN在OLP中的表达及其在炎症反应中的作用。<br>　　材料与方法：<br>　　免疫组化染色和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分别检测OLP及健康对照组中MASPIN、Ikkα的亚细胞定位和表达情况；酶联免疫吸附试验(ELISA)比较OLP及健康对照组中炎性细胞因子(TNF-α，IL-6)的水平。脂多糖(LPS)刺激人口腔角质细胞(HOKs)部分模拟OLP炎性环境，使用CCK8和ELISA实验分别检测LPS对HOKs的毒性作用和LPS刺激HOKs后炎性细胞因子(TNF-α，IL-6)的表达情况，进而确定LPS刺激HOKs的最佳浓度；随后将实验分为四组：分别是实验组(MASPINplasmids、IKKαsiRNA)，阴性对照组(MASPIN-plasmidsNC、IKKα-siRNANC)，荧光对照组(MASPIN-pEX-1、IKKα-FAMNC)和LPS对照组(control)，利用脂质体法分别转染MASPIN质粒和IKKα小干扰RNA并检测转染效率；转染成功后，将实验分为三组：分别是实验组(MASPINplasmids、IKKαsiRNA)，LPS对照组(control)，空白对照组(negative control)，利用Real-timePCR和WesternBlot、ELISA分别检测MASPIN过表达、IKKα沉默后LPS刺激的HOKs中MASPIN、IKKα及炎性细胞因子的mRNA和蛋白表达。<br>　　结果：<br>　　免疫组织化学实验显示MASPIN和IKKα主要定位于OLP组织上皮层的胞质中，另外，同健康对照组相比，OLP组中MASPIN低表达，而IKKα与炎性细胞因子(TNF-α，IL-6)高表达，且差异均具有统计学意义(P＜0.01)。CCK8实验显示5ug/ml和10ug/ml的LPS对HOKs无毒性作用，同时，ELISA实验表明10μg/mlLPS刺激的HOKs中TNF-α和IL-6的蛋白表达量最高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，因此，本实验最终选择10ug/ml的LPS作为刺激浓度；Real-timePCR实验表明MASPIN质粒和IKKαsiRNA均成功转染入HOKs中，且转染效率分别为57%和87%；此外，同LPS对照组相比，MASPIN过表达组中IKKα和炎性细胞因子TNF-α，IL-6低表达，差异具有统计学意义(P＜0.05)，这表明MASPIN过表达抑制了LPS刺激的HOKs中IKKα及TNF-α，IL-6的表达；相反，同LPS对照组相比，IKKα沉默组中MASPIN表达升高，而TNF-α，IL-6表达下降，差异具有统计学意义(P＜0.05)，这表明IKKα沉默促进了MASPIN的表达，抑制TNF-α和IL-6分泌。<br>　　结论：<br>　　本实验发现OLP组织中MASPIN低表达，而IKKα和炎性细胞因子TNF-α、IL-6高表达；过表达MASPIN或沉默IKKα可通过抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达而缓解LPS引起的炎性反应，推测MASPIN及IKKα可能参与并影响了OLP的发生发展，提示MASPIN和IKKα可能为OLP的潜在治疗靶点。