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摘要[目的]：<br>　　LIN28B在早期胚胎发育中发挥重要作用,但在原因不明复发性流产的绒毛滋养细胞植入和分化中作用仍然未明确。筛选原因不明复发性流产(unexplainedrecurrentspontaneousabortion,URSA)与人工终止妊娠（NC）绒毛组织的差异甲基化基因，验证差异基因在URSA组织中的表达情况，并进一步探讨SIRT6/LIN28B/let-7f-5p在正常人绒毛膜滋养层细胞株（HTR-8/SVneo）和人胎盘绒毛膜癌细胞株（BeWo）中发挥的可能作用，是否影响细胞的生理功能（凋亡、侵袭及迁移、融合等），以期揭示原因不明复发性流产的绒毛滋养细胞侵袭和分化异常导致流产的机制。<br>　　[方法]：<br>　　1.全基因组甲基化450K芯片筛查URSA与NC绒毛组织的差异甲基化基因。通过对URSA组绒毛组织（n=3）与NC组绒毛组织(n=3)进行全基因组甲基化450K芯片筛查，分析在胎盘特异性的印记基因差异性甲基化区域(DifferentiallyMethylatedRegion，DMR)的甲基化水平。<br>　　2.利用实时荧光定量PCR(qPCR)，蛋白免疫印迹（WB)、免疫组化（IHC）验证SIRT6/LIN28B/let-7f-5p在URSA胎盘绒毛组织中的mRNA和蛋白水平的表达。<br>　　3.分别在HTR-8/SVneo和BeWo细胞中过表达LIN28B和抑制let-7f-5p后，检测细胞的凋亡、迁移及侵袭、分化融合（仅BeWo）、增殖等的功能变化。<br>　　[结果]：<br>　　1.全基因组甲基化450K芯片筛查结果发现在URSA绒毛组织中LIN28B印记基因TSS200的DMR区甲基化水平升高。<br>　　2.WB、qPCR、IHC均显示URSA绒毛组织LIN28BmRNA和蛋白水平表达量较NC组下降；qPCR显示URSA绒毛组织miRNAlet-7f-5p的表达水平也低于NC组；而qPCR、IHC均显示URSA与NC组的绒毛组织SIRT6mRNA和蛋白水平表达量没有差异。<br>　　3.在细胞水平，过表达LIN28B或let-7f-5p功能抑制后，细胞迁移及侵袭功能增强，细胞的凋亡能力下降，且其能通过促进Akt的磷酸化，抑制Bad的磷酸化及Bcl-2的表达来抑制凋亡。过表达LIN28B后，let-7f-5p表达增加，抑制细胞融合，减少合体化；let-7f-5p功能抑制后，LIN28B表达下降，促进细胞融合，合体化增多。<br>　　[结论]：<br>　　原因不明复发性流产中LIN28B和let-7f-5p表达下降。可能通过调节细胞侵袭和迁移、凋亡和融合，进而使滋养细胞功能失调可能导致流产的发生。而SIRT6在URSA中的作用还需要进一步研究。